曹冉华 呼群

内蒙古医科大学附属医院肿瘤内科，呼和浩特 010050

结直肠癌术后放化疗是重要治疗手段[1]。临床常用的5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-Fu）化疗方案单药反应率不足20%，且化疗药物对正常细胞组织的损伤可导致各类毒副反应发生，影响患者治疗依从性[2]。因此，早期评估结直肠癌患者化疗敏感性与毒副反应风险，对于指导治疗方案的制定与调整有着重要意义。研究发现，胸苷酸合成酶（Thymidylate synthetase，TS）与5-Fu敏感性存在一定关联[3]，在此基础上，本研究选取97例患者，就TS与结直肠癌患者5-Fu化疗敏感性与毒副反应的关系进行了前瞻性分析，现将研究过程与结论报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

患者均为结直肠癌根治术后，入组前未接受相关抗肿瘤治疗，排除病灶远处转移者以及合并其他恶性肿瘤者。97例患者中，男43例，女54例，年龄24～79岁，平均（63.25±10.81）岁，美国癌症联合委员会（AJCC）分期[4]：Ⅲ期47例，Ⅳ期50例；分化程度：高分化29例，中分化30例，低分化38例；浸润深度：T123例，T215例，T337例，T422例。

1.2 TS表达检测

取患者结直肠癌根治术后肿瘤组织标本，将标本蜡块制成4 μm后切片，室温下以二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水。使用3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，PBS溶液冲洗2次；使用正常羊血清工作液封闭样本10 min，加入鼠抗人TS单克隆抗体，PBS溶液冲洗2次；添加辣根过氧化物酶标记的链霉素工作液，于37℃下孵育25 min，PBS溶液冲洗2次；以DAB显色液染色，苏木素复染，中性树胶封固[5]。根据标本染色深度、染色面积判断染色结果，以细胞质内可见棕黄色颗粒为阳性表现，显色不清或不显色、土黄色、棕黄色、褐黄色分别计0分、1分、2分、3分；染色面积0～＜5%、5%～＜35%、35%～＜65%、≥65%分别计0分、1分、2分、3分。染色深度与染色面积之和的1/2为总分，总分 0分为（-），0.5～1分为（+），1.5～2分为（++），2.5～3.0分为（+++），（++）、（+++）为高表达，（-）、（+）为低表达[6]。按照患者TS表达情况，将其分别纳入高表达组、低表达组。

1.3 5-Fu敏感性检测

取患者结直肠癌根治术后肿瘤组织标本，以0.9%氯化钠溶液漂洗2次，剪碎后加入0.25%胰蛋白酶消化液，以200目滤筛过滤，获取单细胞悬浮液。使用4,5-二甲基唑-2（MTT）法对标本5-Fu抑制率进行检测，抑制率≥30%为敏感，抑制率＜30%为不敏感[7]。

1.4 毒副反应评价

参照世界卫生组织（WHO）抗癌药物常见毒副反应分级标准，对两组患者化疗期间毒副反应发生率及分级进行评价，毒副反应分级包括0级、Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级，级别越高则毒副反应越严重。

1.5 统计学分析

对本临床研究的所有数据采用SPSS 22.0进行分析，5-Fu敏感率、总有效率、毒副反应发生率等计数资料均以（n/%）表示，并采用χ2检验，等级资料（毒副反应等级）以（n）表示，并采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 敏感性结果

97例患者中，66例（68.04%）肿瘤组织标本TS高表达，其中（++）27例，（+++）39例，其余31例（31.96%）肿瘤组织标本TS低表达，其中（-）24例，（+）7例。

TS高表达组44例肿瘤组织标本对5-Fu敏感，敏感性为66.67%，高于低表达组的38.71%（12/31），差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 毒副反应

TS高表达组患者均发生不同程度恶心呕吐、骨髓抑制、腹泻、口腔黏膜炎，其毒副反应发生率及毒副反应分级均高于低表达组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组患者化疗期间毒副反应发生率及分级比较（n）

3 讨论

全球范围内，结直肠癌发病率、死亡率分别为10.56%、7.80%，分别居第三位、第五位[8]。文献报道，以TS为代表的5-Fu代谢相关酶也与患者近远期预后密切相关[9-10]。

作为一种胸苷酸合成限速酶，TS主要在分裂和代谢活跃的细胞内保持活性状态，并在DNA的生物合成与细胞生长、增殖中扮演着重要角色[11]。而TS也是5-Fu的中心靶酶，5-Fu及其衍生物抑制TS生成，是发挥抗癌活性的重要机制[12]。因此，此次研究的97例患者中，68.04%的患者肿瘤组织标本TS高表达，且其对5-Fu的敏感性为66.67%，说明TS高表达可上调肿瘤组织对5-Fu化疗的敏感性，其机制一方面与TS是5-Fu的中心靶酶有关。另一方面，5-Fu在组织细胞内被磷酸化后才可转变为活性代谢物并发挥抑制细胞合成、诱导RNA功能障碍作用，而TS高表达往往伴随着乳清酸磷酸核糖基转移酶（OPRT）高表达，故可促进5-Fu磷酸化，上调肿瘤组织对5-Fu的化疗敏感性[13-14]。与高表达组相比，低表达组临床总有效率仅为29.03%，其原因与TS低表达所致5-Fu敏感性不佳有关，此外，肿瘤组织TS低表达者往往存在其他诱发肿瘤细胞增殖、加速病情进展的因素，5-Fu难以消除上述因素可能也是导致患者近期预后不佳的重要原因[15]。

在毒副反应的对比中，高表达组表现出了更高的毒副反应发生率以及毒副反应等级，且全部患者均发生不同程度的不良反应，其原因考虑为：TS与血小板内皮细胞生长因子属于同一类物质，也有着促进血管内皮细胞趋化移动、刺激新生血管生成等作用，故TS高表达意味着更强的表面血管生长与侵袭能力，此时患者病情进展更快、肿瘤恶性程度更高，化疗方案中需要更高的5-Fu剂量，可能影响治疗安全性[16-17]。同时，体内二氢胸腺嘧啶脱氢酶（DPD）是5-Fu转化为5-氟二氢尿嘧啶的关键酶，而TS高表达可抑制DPD表达，故高表达组更低的DPD活性常使得血浆内5-Fu难以转化并排出体外[18]，机体5-Fu大量蓄积也是引发胃肠道毒性、血液毒性并诱发相关毒副反应的重要原因。

综上所述，结直肠癌肿瘤组织中TS高表达可使5-Fu化疗敏感性上升，但也伴随着化疗期间患者毒副反应发生率、毒副反应等级的上升，在今后的临床实践中，对于TS高表达患者而言，可采取5-Fu化疗方案并对用药剂量予以合理调整，以保证治疗效果与安全性；对于TS低表达患者而言，需探索其他治疗方案以确保其预后质量与生存质量的改善。