林迪斯，徐 丽，李飞雨，汪静杰，李 蓓

(湖北医药学院基础医学院，湖北十堰 442000)

肺炎克雷伯菌 (Klebsiellapneumoniae, KP)是存在于人体上呼吸道和肠道的正常菌群，可引起呼吸道、泌尿道、伤口等部位的感染，是社区获得性感染的常见菌株[1-2]。KP包含78个血清型，过去20年由KP强毒型(主要为K1、K2血清型)引起的感染如肝脓肿在全球已被证明，其死亡率可达10%～30%[3]。20世纪60年代，磷酸转移酶系统(phosphotransferase system, PTS系统)第1次在大肠杆菌中作为糖转运系统被提出，已在越来越多的细菌中被找到[4]。根据利用的糖类不同，PTS系统可分为10余种。作为一种复杂的蛋白激酶系统，PTS系统可以调节各种各样的功能运输、代谢和诱变过程及许多基因的表达[5-6]。本课题组前期研究发现，KP纤维二糖PTS系统中EⅡC蛋白编码基因celB敲除株的玻片培养粘附作用不佳，不能完成生物膜形成完整过程，并且小鼠生存率增加12.5%～87.5%[7]。通过对KP NTUH-K2044全基因组分析发现，在KP中存在一个果糖磷酸转移酶系统(KP1_1987-KP1_1993)。环磷酸腺苷受体蛋白(cAMP receptor protein, CRP)能够直接调控此系统中编码EII C蛋白的基因frwC的表达，而CRP基因缺失株细菌生长速度减慢、毒力明显下降[8-9]。在此过程中，CRP是否可以通过调控frwC的表达而影响细菌的生长与毒力？本研究通过构建frwC的缺失突变株与回补株，分析frwC对KP的生长、超黏表型、毒力的影响，从而明确CRP是否能够通过调控frwC的表达而影响其表型。

1 材料与方法

1.1菌株和质粒KP NTUH-K2044分离于肝脓肿患者，为K1血清型超黏表型，已全基因组测序。大肠杆菌DH5α及自杀质粒pKO3-km、km-pGEM-T easy质粒为本室保存。

1.2主要试剂ExTaq酶、Pfu酶、内切酶、T4DNA连接酶、DNA marker为TaKaRa公司产品；……