李 宏,童 燕,张耀东

(1.新疆石河子大学医学院第一附属医院生殖医学科 832000；2.湖北省黄岗市妇幼保健院检验科 438000)

原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是一种累及肝内胆管系统的慢性进展性疾病，多见于中年女性，肝脏组织的病理特点为进展性的、非化脓性、破坏性小胆管炎[1]。PBC主要表现为乏力、皮肤瘙痒、胆汁性肝硬化。PBC患者的发生与多种基因表达有关。PBC病情危重可能诱发水、电解质平衡紊乱、诱发消化道出血、肝性脑病等[2]。IL-10是机体重要的炎症因子，IL-10参与体内多种疾病的进展，是由淋巴细胞分泌的重要细胞因子，可以诱导体内多种炎症细胞包括巨噬细胞、中性粒细胞迁移到炎症局部造成并加重脏器损伤[3-4]。IL-10基因-1082A/A多态性与机体多种炎症因子有关，本研究对比分析本院临床资料，探讨IL-10患者与患者PBC病情及预后的关系，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2013年5月至2015年5月在本院就诊的480例PBC，诊断参照中华医学会指定的相关诊断标准，纳入标准：(1)所有患者均符合PBC的相关诊断标准；(2)年龄大于18岁；排除标准：(1)合并恶性肿瘤、精神异常或其他认知功能障碍的患者；(2)合并免疫缺陷性或其他影响患者血清IL-10水平检测的患者；(3)合并其他慢性系统疾病包括高血压、糖尿病等其他疾病的患者；480例患者中男240例、女240例，年龄(23.1±1.9)岁，BMI(23.1±1.9)kg/m2，所有患者均知情同意本研究，且本研究经本院医学伦理委员会批准，并以同期480例健康体检者作为对照组。

1.2方法 采取两组患者血液标本，使用Promega公司试剂盒及Eppendorf核酸定量仪测定白细胞中DNA水平，进一步使用ABI7500型测序级扩增仪扩增IL-10基因-1082A/A的相应基因片段，双相测序法分析PCR产物。

1.3观察指标 (1)病情评估：采用Child分级和MELD评分评价患者病情，具体参照文献[5]；(2)检测血清中IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平：抽取外周血5 mL,TNF-α和IL-10试剂盒购于武汉博士德生物制剂有限公司，检测方法参照试剂说明书进行。

2 结 果

2.1观察组和对照组IL-10基因-1082A/A基因型分布情况 观察组患者IL-10基因-1082G/A基因型为A/A占47.5%，明显高于对照组的14.2%，基因型为A/A的患者PBC的风险是C/C的2.8倍，基因型为A/C患者患PBC的风险是C/C的1.6倍，含A基因患者患PBC的风险为不含A基因的1.9倍，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 观察组和对照组IL-10基因-1082A/A基因型分布情况[n(%)]

表2 不同基因型患者血清中IL-10和TNF-α分泌的比较±s，ng/L)

a：P<0.05，与A/C比较；b:P<0.05，与C/C比较；c:P<0.05，与AnyA比较；d:P<0.05,与对照组比较

表3 不同基因型PBC患者血清中Child分级和MELD评分的比较±s，分)

a：P<0.05，与A/A比较；b:P<0.05，与A/C比较；c:P<0.05，与C/C比较；d:P<0.05,与AnyA比较

2.2不同基因型患者血清中IL-10和TNF-α表达水平比较 观察组患者各基因型IL-10和TNF-α水平明显高于对照组各基因型，观察组患者基因型A/A患者IL-10和TNF-α水平分为(33.6±9.5)、(18.9±7.3)ng/L,明显高于其他基因型和对照组各基因型，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3不同基因型PBC患者Child分级和MELD评分的比较 A/A基因型患者Child评分和MELD评分分别为(8.6±1.8)分和(31.5±3.6)分明显高于A/C、C/C、Any A基因型的患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

2.4PBC患者死亡的多因素分析 将性别、年龄、肝功能、胆红素水平、IL-10的基因型、血清中IL-10、TNF-α水平作为单因素，以患者死亡为终点事件，采用Logistic回归模型分析提示：IL-10基因-1082A/A(P=0.01)、IL-10(P=0.02)、MELD评分(P=0.01)是PBC患者死亡的独立危险因素，见表4。

表4 PBC患者死亡的多因素分析

3 讨 论

PBC是一种慢性自身免疫系统疾病，常见于女性，以肝内胆汁淤积为主要临床特点,可导致严重瘙痒、胆管炎等临床表现，病情进展为终末期肝病可诱发一系列并发症包括消化道出血、肝性脑病等[5]。PBC患者体内存在多种自身免疫性抗体，体内多种自身免疫性抗体可导致机体肝脏损伤和其他脏器损伤，PBC病理进展可最终诱发终末期肝脏疾病导致患者预后不良[6-7]。积极发现PBC患者病理生理机制，进行早期临床干预有助于改善PBC患者临床预后。

IL-10是淋巴细胞分泌的重要细胞因子，与机体炎性反应程度和细胞免疫活化程度密切相关。IL-10可能通过活化中性粒细胞MYD88信号通路，刺激细胞内NF-κB大量分泌，促进胆管上皮细胞损伤，进一步加重PBC患者的病情进展[8-11]。而IL-10基因多态性可能参与PBC患者发病及患者病情的进展，本研究探讨IL-10基因多态性与PBC的关系，结果提示基因型A/A的患者PBC的发病率明显更高，这可能是基因型为A/A的患者可以影响血清中IL-10的分泌进而影响PBC病情的进展，导致PBC的发生。基因型为A/A的患者可能刺激机体分大量的炎症介质，且可能对患者造成免疫炎症损伤而诱发PBC。

血清中IL-10大量活化是导致PBC患者预后不良的重要因素，本研究对比不同基因型患者IL-10和TNF-α水平，结果发现基因型为A/A的患者体内TNF-α和IL-10水平明显更高，而TNF-α水平进一步增高可导致患者体内大量炎症细胞活化进一步损伤患者肝细胞和胆管上皮细胞[12-15]。这就意味着基因型为A/A的患者可能通过影响患者血清中炎症介质分泌，加重PBC的病理生理进展。

MELD和Child评分是评价肝硬化病变程度的指标，被广泛运用。本研究还对比了观察组患者不同基因型PBC患者MELD和Child评分，结果提示血清中基因型为A/A的患者MELD和Child评分均明显高于其他基因型患者(P<0.05)。这提示基因型为A/A可能通过调节患者病理机制刺激分泌炎症因子，而影响患者病理进程，加重局部肝脏组织的损伤。笔者进一步采用Logistics回归分析探讨患者血清中IL-10基因多态性、TNF-α等因素与患者临床预后的关系，结果提示IL-10基因型为A/A、IL-10水平及MELD评分是患者死亡的独立危险因素，这意味着机体炎症因子分泌在PBC病情中具有重要的意义，可能与PBC病理机制密切相关。

综上所述，PBC是自身免疫系统疾病，患者血清中IL-10基因多态性参与体内多种炎症因子的分泌和释放，基因型为A/A可增加PBC发生的风险，是患者死亡的重要风险因素，值得临床关注。