王静，贺英，王萍，武欣

(1河北北方学院附属第一医院,河北张家口，075000；2河北北方学院病理教研室)

卵巢癌是妇女常见的致死性恶性肿瘤之一[1]，大多数患者就诊时已为晚期，临床治疗和预后均不理想。早期诊断和早期治疗是卵巢癌最有效的治疗方法。泛素1属于泛素样蛋白一族，在调节蛋白质降解中起着重要作用。在真核生物中，泛素1连接蛋白酶体和泛素化蛋白质以刺激泛素化蛋白质降解，促进错误折叠的自噬调节[2]。泛素1功能的失活可诱导人类多种神经退行性疾病的病理过程，例如阿尔茨海默病和亨廷顿病等[3,4]。泛素1与鼻咽癌、非小细胞肺癌和胰腺癌的发生发展有关[5～7]，但泛素1在卵巢癌组织中的表达及作用尚未见相关报道。本研究观察了卵巢癌组织中泛素1的表达变化，分析其表达水平与卵巢癌患者临床病理参数的关系及与卵巢癌预后的相关性，为卵巢癌的诊断和预后预测提供分子生物学标记物。

1 资料与方法

1.1 临床资料 河北北方学院附属第一医院2012年1月～2015年1月收治的卵巢癌患者80例，均接受手术治疗(术前未接受其他治疗)，术中留取卵巢癌组织(自癌灶中心处获取)和相应癌旁正常组织。80例患者术后定期复查、电话随访，末次随访时间为2017年12月31日，中位随访时间为25个月;随访期间24例生存，56例死亡。

1.2 受检组织中泛素1的检测 采用免疫组化法。鼠抗UBQLN1单克隆抗体(编号：128011)购于美国Abcam公司，免疫组化试剂盒、DAB显色剂购于上海Gene Tech公司。受检组织用10%的甲醛溶液固定，石蜡包埋，4 μm厚切片，染色，切片进行烘烤，乙醇脱水，内源性过氧化物酶灭活，高温高压水化修复，PBS冲洗，先后加入一抗(1∶100)50 μL、二抗50 μL。DAB显色，轻度复染，冲洗，梯度乙醇脱水，松节油透明和树胶行封片处理,光镜下观察。PBS代替一抗作阴性对照。泛素1主要表达于细胞质，少量表达于细胞核，呈棕黄色或褐色颗粒。计算泛素1阳性染色细胞百分比，阳性细胞1%～10%计1分、11%～50%计2分、51%～80%计3分、81%～100%计4分；细胞无着色计0分、浅黄色计1分、黄色计2分、深黄色计3分；上述两分值相乘，乘积0为-、1～4为+、5～8为++、9～12为+++，+、++、+++定为阳性[5]。

1.3 卵巢癌组织中泛素1表达与卵巢癌患者临床病理参数的关系分析 收集80例卵巢癌患者临床病理资料，包括患者年龄、是否绝经、肿瘤分化程度、肿瘤大小、FIGO分期、淋巴结转移、血清CA125、血清HE4、Ki-67，分析卵巢癌组织中泛素1表达与上述指标的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计数资料比较用χ2检验，相关性分析用Spearman秩相关分析法，通过Cox回归模型分析卵巢癌患者预后的独立影响因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 泛素1在卵巢癌组织与癌旁正常组织中的表达比较 泛素1在卵巢癌组织中的阳性表达率为72.50%(58/80)，癌旁正常组织为17.50%(14/80)，两者相比，P<0.01。卵巢癌组织和癌旁正常组织中泛素1的表达情况见图1。

注：a为癌旁正常组织中泛素1的表达情况； b 为卵巢癌组织中中泛素1的表达情况。

图1卵巢癌组织和癌旁正常组织中泛素1的表达(×200)

2.2 卵巢癌组织中泛素1表达与卵巢癌患者临床病理参数的关系 卵巢癌组织中泛素1的阳性表达与卵巢癌患者肿瘤分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、CA125(+)、HE4(+)和Ki-67(+)有关(P均<0.05)，与患者年龄、肿瘤大小、是否绝经等无关(P均>0.05)，见表1。卵巢癌组织泛素1阳性表达的58例中Ki-67表达阳性者44例、阴性14例，泛素1阴性表达的22例中Ki-67阳性8例、阴性14例，两者表达呈正相关，r=0.259，P<0.01。

2.3 卵巢癌组织泛素1表达与卵巢癌患者生存预后的关系 卵巢癌组织泛素1阳性表达的58例卵巢癌患者，12例生存、46例死亡，中位生存时间为22个月；泛素1阴性表达的22例患者中，10例生存、12例死亡，中位生存时间为30个月；两者相比，P<0.05。

泛素1表达、淋巴结转移、肿瘤分化程度、FIGO分期、CA125(+)、HE4(+)、Ki-67表达均是影响卵巢癌预后的独立影响因素(P均<0.05)。

3 讨论

泛素1是一种核小体表面蛋白，属于高度保守的泛素样蛋白家族中的重要成员，位于人9q22染色体，内含589个氨基酸序列，在人体组织中广泛表达。泛素1由11个外显子、3个功能结构域组成;其中N末端系泛素样区域(介导与蛋白酶体的相互作用)，C末端系泛素相关区域,中间的STI伴侣样区域负责传递功能，三者共同将多泛素化靶目标提供给特定的蛋白，促进蛋白酶体降解[8,9]。泛素1能通过促进错误折叠的自噬调节、诱导细胞凋亡和受体转运等多种调控机制影响肿瘤细胞的迁移和侵袭等生物学行为[10～12]。Bao等[13]采用免疫组织化学法检测179例胃癌及癌旁正常组织中的泛素1，发现其在胃癌组织中的表达上调，且泛素1高表达与胃癌组织学分级、浸润、分期、淋巴结转移密切相关，泛素1高表达的胃癌患者预后较差；Wang等[14]采用免疫组织化学检测125例浸润性乳腺癌样本中的泛素1，发现其在癌组织中呈过表达，且其表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期和血管侵犯相关，泛素1阳性患者5年无病生存期和总生存期远低于泛素1阴性患者，同时首次证实了泛素1是浸润性乳腺癌患者总生存期的独立预后因素。

表1 卵巢癌组织中泛素1表达与卵巢癌患者临床病理参数的关系

本研究结果显示，泛素1在卵巢癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织，且泛素1的阳性表达与卵巢癌分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、血清CA125(+)和HE4(+)有关，且泛素1与Ki-67表达呈正相关，二者在卵巢癌的发生、发展过程中可能具有协同作用。Shah等[15]通过实验证实泛素1基因沉默能促进肺癌细胞迁移和浸润，泛素1基因的缺失导致包括E-钙黏蛋白和Claudin1在内的上皮标记物表达的降低，而包括波形蛋白、Snail和ZEB1在内的间充质标记物的表达升高，因而考虑泛素1能诱导肌动蛋白细胞骨架重组和上皮细胞间质转变，从而促进肿瘤的侵袭和转移[16]。

本研究结果显示，泛素1阳性表达的卵巢癌患者生存期明显短于阴性表达的患者，泛素1阳性表达提示预后不良，Cox回归模型分析显示泛素1阳性表达为卵巢癌患者预后的独立影响因素。

综上所述，泛素1在卵巢癌组织中的阳性表达率较高，与卵巢癌的临床病理特征及预后关系密切，其在卵巢癌的发生、发展中可能发挥重要作用，临床上可将其作为卵巢癌诊断和预后预测的潜在生物学指标。进一步对泛素1致癌机制的深入研究将为卵巢癌的靶向治疗提供理论基础。