赵 鑫，曾 强，王 洋，曹经林，任贵军

（河北医科大学第三医院肝胆外科，河北 石家庄 050010）

肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤[1]。研究发现，恶性肿瘤的转移与其微血管和微淋巴管的密度密切相关。环加氧酶（cyclooxygenase，COX）是前列腺素（prostaglandins, PG）合成过程中的限速酶，其底物是花生四烯酸[2]。大量的临床实验结果表明，COX-2在消化系统肿瘤的发生、发展及转移过程中起着重要的作用[3-4]。本文主要研究肝癌组织中COX-2蛋白的表达与肝癌组织中微血管密度（MVD）和微淋巴管密度（MLVD）的相关性，分析COX-2蛋白的表达在肝癌转移中的作用，以期为肝癌的临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究的对象是2016年10月至2017年10月期间河北医科大学第三医院收治的50例肝癌患者。在这些患者中，有男性30例，女性20例；其年龄为29～68岁，平均年龄为（42.5±0.9）岁。本次研究对象的纳入标准是：1）其年龄＞18岁；2）其肿瘤的临床分期符合2001年全国肝癌会议发布的关于肝癌的分期标准[5]。本次研究对象的排除标准是：1）其肿瘤的临床分期不明确或临床资料不全；2）其合并有其他的原发性恶性肿瘤。

1.2 研究方法

研究这些患者的性别、年龄、肿瘤细胞的分化程度、肿瘤的临床分期及是否存在淋巴结转移等临床资料。使用免疫组化法检测这些患者肝癌组织中COX-2蛋白的表达，分析其肝癌组织中COX-2蛋白的表达与MVD和MLVD的关系，从而判定肝癌组织中COX-2蛋白的表达与肿瘤转移的相关性。

1.3 评定标准[6]

1）用PBS缓冲液作为空白对照品。在显微镜下观察这些患者肝癌组织标本的HP染色图片。COX-2蛋白表达的阳性标准是：患者肝癌组织中的细胞膜、细胞浆内可见棕黄色的颗粒。COX-2蛋白表达的阴性标准是：患者肝癌组织中的细胞膜、细胞浆中未见着色颗粒。在高倍显微镜下观察这些患者的病理切片。在每个病理切片中任意选择5个视野，在每个视野中选择200个肿瘤细胞，共选择1000个肿瘤细胞。COX-2蛋白表达呈阳性的肿瘤细胞的数量所占的比例若＜1%，表示肿瘤组织中COX-2蛋白的表达呈阴性(-)；COX-2蛋白表达呈阳性的肿瘤细胞的数量所占的比例若为1%～10%，表示肿瘤组织中COX-2蛋白的表达呈弱阳性(+)；COX-2蛋白表达呈阳性的肿瘤细胞的数量所占的比例若为11%～50%，表示肿瘤组织中COX-2蛋白的表达呈中度阳性(++)；COX-2蛋白表达呈阳性的肿瘤细胞的数量所占的比例若≥51%，表示肿瘤组织中COX-2蛋白的表达呈强阳性(+++)。除检查结果为阴性以外，均可判定肿瘤细胞中的COX-2蛋白呈阳性表达。2）参照 Weidner计数法，在低倍显微镜下观察这些患者的病理切片。在每个病理切片中选取2个染色阳性数目较多的区域。然后在高倍显微镜下观察每张病理切片[7]。计算经CD34标记的微血管的数量，每个病理切片取5个视野，取其平均值，计算MVD和MLVD。

1.4 统计学方法

使用SPSS13.0统计软件对本次研究中的数据进行处理。计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用t检验。计数资料用百分比（%）表示，采用χ²检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

在这些肝癌患者中，不同年龄、性别的患者其肝癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率相比差异均无统计学意义（P＞0.05）。肿瘤分期为Ⅰ期、Ⅱ期的患者其肝癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率低于肿瘤分期为Ⅲ期、Ⅳ期的患者（P＜0.05）。肿瘤细胞的分化程度为低分化的患者其肝癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率高于肿瘤细胞的分化程度为中、高分化的患者（P＜0.05）。存在淋巴结转移的患者其肝癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率高于不存在淋巴结转移的患者（P＜0.05）。对同一组织细胞中COX-2蛋白的表达与MVD和MLVD的相关性进行分析的结果显示，肝癌组织中COX-2蛋白的表达与MVD呈正相关(r=0.6261，P＜0.001)。肝癌组织中COX-2蛋白的表达与MLVD呈正相关(r=0.6091，P＜0.001)。详情见表1。

表1 不同的肝癌患者其肝癌组织中COX-2蛋白表达阳性率的比较

3 讨论

研究发现，微血管、微淋巴管的形成是肿瘤发生、发展的重要过程[8-9]。COX-2蛋白是前列腺素合成过程中一种重要的限速酶，其表达呈诱导性。COX-2蛋白参与了肝癌发生、发展的全过程，在肝癌组织中呈高表达。COX-2蛋白是通过抑制正常细胞的凋亡、增强肿瘤细胞的繁殖能力、促进肿瘤内血管的形成、增强肿瘤细胞的侵袭力参与到肿瘤发生、发展的过程中[10]。研究发现，COX-2蛋白的表达水平与肿瘤组织的病理类型、临床分期、是否存在淋巴结转移等因素密切相关[11]。本次研究的结果显示，COX-2蛋白在低分化肝癌组织中的表达水平高于在中、高分化肝癌组织中的表达水平。肿瘤分期为III期、IV期的患者其肝癌组织中COX-2 蛋白的表达水平高于肿瘤分期为Ⅰ期、Ⅱ期的患者。存在淋巴结转移的患者其肝癌组织中COX-2 蛋白的表达水平高于不存在淋巴结转移的患者。在同一个肝癌组织中，COX-2蛋白的表达与MVD及MLVD均呈正相关。说明肝癌组织中COX-2蛋白的表达在肿瘤转移的过程中起着促进的作用。因此有研究者认为，COX-2蛋白抑制剂可能对肝癌患者癌细胞的转移具有抑制的作用，这为肝癌的临床治疗提供了新的思路。

本次研究的结果证实，肝癌组织中COX-2蛋白的过度表达，可促进肝癌组织中微血管和微淋巴管的生长，使MVD和MLVD增加，从而使肿瘤发生转移。