胡 畔， 郭 凡

湖北中医药大学附属医院湖北省中医院&湖北省中医药研究院，湖北 武汉 430061

高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1, HMGB1)是一种广泛分布于哺乳动物细胞中的高度保守的核蛋白，其可通过与Toll样受体4和晚期糖基化终末产物受体等细胞表面受体结合参与炎症反应，与多种炎症性疾病的发生和发展密切相关[1-3]。越来越多的研究[4-6]发现，HMGB1在肝脏、脑和心脏等器官的缺血再灌注损伤中异常高表达，与组织细胞的凋亡关系密切，但其对胃缺血再灌注损伤的研究较少。研究HMGB1对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的调控机制对临床防治胃缺血再灌注损伤具有重要意义。缺氧复氧细胞模型(A/R)是研究缺血再灌注损伤的经典细胞模型[7-8]，本研究以人胃黏膜上皮GES-1细胞为研究对象，制备A/R细胞模型，利用RNA干扰技术下调GES-1细胞中HMGB1表达，观察HMGB1对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的影响，并探讨其可能的分子机制，旨在为胃缺血再灌注损伤的防治提供新线索。

1 材料与方法

1.1细胞与试剂人胃黏膜上皮细胞株GES-1购自美国ATCC，DMEM/F12培养基和脂质体2000购自美国Invitrogen公司，胎牛血清购自美国Gibco公司，HMGB1 siRNA和Control siRNA购自Thermo公司。MTT试剂和二甲基亚砜购自美国Sigma公司，NF-κB p65抗体和IκB-α抗体、Cleaved caspase-3抗体、Bcl-2抗体、β-actin抗体和HRP标记的二抗购自美国Santa Cruz公司。总蛋白提取试剂盒和AnnexinⅤ-FIFC/PI凋亡试剂盒购自上海凯基生物公司，LDH ELISA检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，BCA蛋白定量试剂盒购自美国ThermoScientific公司，ECL试剂盒购自美国Pierce公司。

1.2实验分组及处理实验分为4组：对照组、A/R组、A/R+siNC组、A/R+siHMGB1组。对照组：采用DMEM/F12培养基(含质量浓度为100 g/L的胎牛血清)于体积分数为5%的CO2、体积分数为20%的O2和温度为37 ℃的正常条件下培养GES-1细胞。……