加味芎蝎散对咳嗽变异性哮喘大鼠气道平滑肌中自噬蛋白表达的干预作用*
2018-09-22徐荣谦杨冬妹孙洮玉
杨 斌 徐荣谦 杨冬妹 孙洮玉△
(1.中国中医科学院西苑医院,北京 100091;2.北京中医药大学东直门医院,北京 100700)
气道平滑肌细胞肥大、过度增殖是咳嗽变异性哮喘(简称CVA)气道重塑的重要病理生理基础[1]。诱导平滑肌细胞凋亡,增进其自噬,有助于逆转CVA气道重塑,改善气道高反应性[2]。加味芎蝎散是徐荣谦教授的经验方,由传统古方芎蝎散加减而来,临床运用效果斐然,特别在解痉平喘上疗效显著[3-4],提示该药可能具有松弛支气管平滑肌,减少气道炎症的作用[4]。前期研究发现,加味芎蝎散可以诱导气道平滑肌细胞凋亡来逆转气道重塑[5]。而自噬与凋亡之间存在着复杂的的内在关系,它们可受共同的上游信号调控[6]。对于自噬机制是否参与CVA气道重塑以及加味芎蝎散是否干预自噬蛋白的表达,笔者现将研究结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物
SD大鼠40只,健康雌雄各半,体质量(140±20)g,8周龄,北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2012-0001。SPF级动物环境,自由摄食、饮水,并通过动物研究委员会同意。
1.2 试药与仪器
1)试药:孟鲁司特钠片(杭州默沙东,4 mg/片,国药准字J20070058),加味芎蝎散方(组成:川芎5 g,全蝎 3 g,芦根 20 g,荜茇 1 g,半夏 5 g,细辛 1 g,五味子10 g,白前10 g),东直门医院制剂室提供颗粒剂,常温保存。卵蛋白VOA (美国Sigma,批号:A5253-1009),氢氧化铝凝胶(美国 Sigma,批号:A8222-250 mL),Masson 三色试剂盒(北京 Solarbio),LC3(美国 Abcam,货号 ab207612,批号:GR219675-1)、Beclin1 兔多克隆抗体(美国 Abcam,货号 ab192890,批号:GR3174342-14)、二抗 PV6000 和 DAB(北京中杉金桥)。2)仪器:雾化器(WH-2000,广东粤华),全自动脱水机(TP1020,德国 Leica),切片机(RM2235,德国 Leica),电子显微镜(ASM510,德国 Zeiss),病理图像分析系统(Cmias,北航)。……
