卢雪花 孙凤灵 李丽莎

【摘 要】 目的：建立一种基于内部转录间隔区2（ITS 2）序列突变位点鉴别建泽泻的焦磷酸测序方法。方法：分别提取建泽泻与川泽泻的须根、叶片、叶柄DNA，采用焦磷酸测序方法进行分析鉴定，并通过毛细管电泳测序验证方法的正确性。结果：建立了一种基于ITS 2序列焦磷酸测序鉴定方法，经毛细管电泳测序验证结果准确可靠。建泽泻ITS 2序列中的突变位点A-T的突变频率均不小于83%。结论：焦磷酸测序方法可以准确鉴定不同基源的泽泻物种。

【关键词】 焦磷酸测序；建泽泻；鉴定；ITS 2

【中图分类号】R286.0 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）16-0026-03

Abstract：Objective Establish a pyrosequencing method based on the ITS 2 sequence mutation sites to identify Alisma orientalis. Methods DNA was extracted respectively from roots， leaves and petiole of Alisma orientalis and analyzed by pyrosequencing. The correctness of the method was verified by capillary electrophoresis sequencing. Results A pyrosequencing method based on the ITS 2 sequence was established. This method was verified by capillary electrophoresis sequencing to be accurate and reliable. The mutation frequency from A to T site was not less than 83% in the ITS 2 sequence of Alisma Orientalis. Conclusion Pyrosequencing can accurately identify Alisma species from different sources.

Keywords：Pyrosequencing； Alisma Orientalis； Identification； ITS2

泽泻为多年沼生泽泻科植物泽泻Alisma orientalis （Sam.）Juzep.的干燥块茎，最早历史记载可追溯到《神农本草经》。其性寒味甘，有泄热、利水渗湿、化浊降脂的功效[1]，主要有利尿[2]、降血糖[3-5]，降血脂[6-9]等活性。泽泻主产福建、四川、江西等地，素有“建泽泻”、“川泽泻”、“江泽泻”之称，以建泽泻、川泽泻量大且使用广泛，其中又以建泽泻质佳，被载入中国的道地药材。目前主要采用性状鉴别和化学成分分析对泽泻进行鉴定，该方法鉴定结果主观性较强，准确性无法得到保证。焦磷酸测序技术（Pyrosequencing） 是一种基于酶催化反应的新一代测序技术，其精确性和可重复性高，并能够实时、直观地提供序列信息，同时能定性定量分析差异碱基。该技术利用生物素标记一条扩增引物，扩增产物无需荧光标记与电泳分离，因此操作更为简便、快捷。本实验采收福建省建瓯建泽泻药材，同时以川泽泻作为对照药材（采自四川省眉山），采用焦磷酸测序方法鉴定其基源，为今后泽泻的质量控制研究奠定基础。……