利用组织芯片技术研究SHIP2蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及意义*
2018-09-12倪慧慧王炳芳
倪慧慧 王炳芳
1.江苏大学附属昆山市第一人民医院感染科 (江苏 昆山, 215300) 2.江苏大学附属昆山市第一人民医院消化科
含SH2结构域的肌醇多磷酸5′-磷酸酶-2(SHIP2)是Pesesse等(1997)[1]发现的一种蛋白酶,属于肌醇多磷酸5′磷酸酶家族系列,我们采用组织芯片技术和免疫组织化学方法,对42例原发性肝细胞癌及30例癌旁正常肝组织SHIP2蛋白的表达及其意义进行探讨,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集我院2002年至2011年原发性肝癌标本42例,其中男27例,女15例;年龄范围(28~75)岁,平均年龄(52.2±14.6)岁,≥60岁18例,<60岁24例;高分化19例,中分化14例 ,低分化9例;有门静脉癌栓28例,无门静脉癌栓14例。对照组癌旁正常肝组织30例,男21例,女9例;年龄范围(26~77)岁,平均年龄(53.4±13.8)岁,≥60岁11例,<60岁19例;其中高分化15例,中分化10例 ,低分化5例;有门静脉癌栓21例,无门静脉癌栓9例;两组人群基本情况比较P>0.05,差异无统计学意义,具有可比性。
1.2 主要试剂 鼠抗人SHIP2单克隆抗体和免疫组化试剂盒均购自上海今迈生物科技有限公司。
1.3 组织芯片制作 手术切除标本常规石蜡包埋,首先在HE染色切片上进行定位,应用购自西安艾丽娜生物科技有限公司制作仪取材,制成两块组织芯片模块,选取癌组织84个位点,癌旁正常肝组织60个位点,取样针直径2 mm,制作2个芯片蜡块,以4μm厚度连续切片,敷贴于经1%多聚赖氨酸处理的载玻片,各取1张进行HE染色供形态学观察,其余切片行免疫组化检测。
1.4 试验方法和结果判断 免疫组化采用IHC染色方法,观察整张组织切片,每个芯片在电镜下随机选择四域,并采用免疫组化染色阳性率评分(IHS)。IHS是由染色强度和密度确定评价。染色强度评分如下:0(负),1(弱阳性),2(中正),和3(强阳性)。SHIP2阳性细胞百分率也根据以下评分分为四类:1分代表0到10%,2分是11%到50%,3分是51%到80%,和4分代表81%到100%。强度的总和的百分比分数得出最终的IHS:总分低于3的样本(IHS≤3)被认为是低SHIP2表达,为阴性表达。……
