贺 文， 吴婉婉， 陆 平， 薛志刚， 盛哲津， 祝献民

(1. 同济大学医学院,上海 200092； 2. 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092)

成簇的、规律间隔的短回文重复序列技术(clu-stered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)是近年来发展起来的一种高效的基因编辑工具，已经广泛的应用在基因治疗、基因功能研究、农作物品种改良、动物模型制作、靶向药物筛选和材料生物学等领域[1]。它能够快速、高效地对特异的基因组位点进行切割或置换，而且特异性高，细胞毒性低[2]。然而基于核酸内切酶的CRISPR基因编辑检测存在灵敏度低，特异性差等问题[3]。基因型鉴定分析是遗传学和生物医学领域最常见的分析手段，但高通量快速鉴定基因型仍然是亟待解决的问题[4]。综上，快速和高效地检测CRISPR基因编辑产物以及生物样本的基因型具有非常重大的应用前景。高分辨率熔解曲线(high-resolution melting curve, HRM)分析是近年来发展起来的一种新型基因分析技术，通过区分不同核酸组成的熔解曲线差异，能够鉴定基因组突变和单核苷酸多态性[5]。HRM技术具有高特异性、高灵敏性、高通量、低成本、速度快等优点，因而在临床诊断及基因分析上得到迅速的应用与发展，现已成为生命科学研究中的热点技术[6-7]。每种DNA具有特定的熔解曲线[8]，因此HRM可以应用于CRISPR技术切割产物以及基因型的快速鉴定。然而目前HRM分析通常依赖PCR平台匹配的收费软件，由于版权和价格问题，不利于在实验室推广。

本研究将在线HRM分析软件与PCR技术进行结合，提高了CRISPR技术体外切割产物验证及不同基因型鉴定的效率。……