40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂的高效液相色谱分析

2018-09-10高敬雨刘润峰

世界农药 2018年4期

潘静，东琴，高敬雨，刘润峰

(北京明德立达农业科技有限公司，北京 102206)

联苯肼酯(bifenazate)是联苯肼类杀螨剂，纯品外观为白色固体结晶[1]。该剂系M.A.Dekeyser等于1996年报道，由Uniroyal公司发现并由Uniroyal公司和Nissan公司联合开发，于2000年上市。联苯肼酯是一种新型选择性叶面喷雾用杀螨剂。该剂作用机制为对螨类的中枢神经传导系统的一种 γ-氨基丁酸(GABA)受体有独特作用。该剂对螨的各个生活阶段有效，具有杀卵活性和对成螨的击倒活性(48～72 h)，持效期长达14 d左右，推荐使用剂量范围内对作物安全[1,2]。乙螨唑(etoxazole)化学名称：(RS)-5-叔丁基-2-[2-(2,6-二氟苯基)-4,5-二氢-1,3-噁唑-4-基]苯乙醚，是日本八洲化学公司于1994年开发的新颖噁唑类触杀型杀螨剂，可抑制螨正常蜕皮过程并具有杀卵活性，能有效控制螨的整个幼龄期(卵和若螨)，此外还对雌性成螨有不育作用[4]。乙螨唑是具有特殊结构的杀螨剂，对卵及幼螨有卓效，主要具有触杀作用，持效期长[5]。该剂高效、低毒和对非靶标生物安全，符合当今绿色杀虫剂的要求[6]。

1 试验部分

1.1 仪器和试剂

仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪；紫外检测器；Agilent色谱工作站；色谱柱：150 mm×4.6 mm(i.d.)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C18填充物，粒径5 µm；超声波清洗器；过滤器：过滤膜孔径0.45 µm。乙腈：色谱纯；水：新蒸二次蒸馏水；联苯肼酯标准品≥98.0%；乙螨唑标准品≥99.0%(两者均由北京明德立达农业科技有限公司提供)；40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂(25%联苯肼酯+15%乙螨唑，北京明德立达农业科技有限公司研制)。

1.2 色谱操作条件

流动相：乙腈∶水＝80∶20(体积比)；检测波长：220 nm；流速：1.0 mL/min；进样体积：5 µL；柱温：(25±2) ℃。在上述色谱操作条件下，联苯肼酯的保留时间约为2.6 min；乙螨唑的保留时间约为7.0 min。典型的液相色谱图如下见图1、图2。

图1 联苯肼酯、乙螨唑标准样品的高效液相色谱图

图2 40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂的高效液相色谱图

1.3 溶液配制

1.3.1 标样溶液的配制

分别称取联苯肼酯标样15 mg、乙螨唑标样9 mg(精确至0.000 02 g)，置于50 mL容量瓶中，加入适量乙腈溶解，流动相定容，摇匀后备用。

1.3.2 试样溶液的配制

准确称取试样60 mg (精确至0.000 02 g)，置于50 mL容量瓶中，加入适量流动相溶解并定容、摇匀后，过0.45 µm有机系滤膜，备用。

1.4 测定

在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值，直至相邻2针联苯肼酯(乙螨唑)响应值相对变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。用外标法计算各自含量。

1.5 计算

将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中的联苯肼酯(乙螨唑)峰面积分别进行平均。试样中联苯肼酯(乙螨唑)的质量分数X(%)按下式计算：

式中：A1——标样溶液中，联苯肼酯(乙螨唑)峰面积的平均值；A2——试样溶液中，联苯肼酯(乙螨唑)峰面积的平均值；m1——联苯肼酯(乙螨唑)标样的质量，单位为克(g)；m2——试样的质量，单位为克(g)；P——标样中联苯肼酯(乙螨唑)的质量分数，%。

1.6 允许差

两次平行测定结果之差，联苯肼酯、乙螨唑分别应不大于0.5%、0.3%，取其算术平均值，作为测定结果。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

通过UV-1800型紫外可见分光光度计分别对联苯肼酯和乙螨唑标样溶液进行紫外扫描，乙螨唑在200.0～230.0 nm均有紫外吸收；联苯肼酯在204.9 nm、230.8 nm和265.0 nm处均有较大紫外吸收，考虑到低波长处紫外吸收会有溶剂或助剂的干扰，同时兼顾联苯肼酯和乙螨唑的峰面积和峰高的差距尽量小，最终选择220 nm作为联苯肼酯、乙螨唑的检测波长。

2.2 流动相的选择

为达到联苯肼酯和乙螨唑的有效分离，先后对甲醇和水、甲醇和冰乙酸水溶液、乙腈和水、乙腈和冰乙酸水溶液的不同体积配比进行试验，最后发现用乙腈和水(体积比为 80∶20)做流动相，流速为1.0 mL/min时，分离效果好，出峰时间短，且峰形尖锐、对称。综上因素，选定乙腈+水(体积比80∶20)作为流动相。

2.3 分析方法的线性关系曲线

分别配制5组不同质量浓度的标准溶液，按上述色谱操作条件进样分析，每个浓度分析2次，求其峰面积平均值。以联苯肼酯质量浓度为横坐标，峰面积平均值为纵坐标绘制标准曲线，得联苯肼酯线性回归方程y=20.506 0x-12.727 2，其线性关系系数 R2=0.999 5 (图 3)；得乙螨唑线性回归方程 y=13.350 1x+51.310 6，其线性关系系数R2=0.999 3，表明线性关系良好(图4)。

2.4 分析方法的精密度

按上述色谱操作条件，对同一个样品连续进行5次平行测定。测得联苯肼酯和乙螨唑的标准偏差分别为0.14和0.11；变异系数分别为0.55%和0.72% (表1)。表明此方法的精密度能够满足定量分析的要求。

表1 40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂精密度测定

2.5 分析方法的准确度

为了考察分析方法的准确度，测定登品的回收率。在已知含量的40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂中加入一定量的联苯肼酯、乙螨唑的标样，按上述色谱操作条件进行测定，并计算回收率。测定联苯肼酯的回收率为 98.42%～100.80%，平均回收率为99.49%；乙螨唑的回收率为98.39%～100.22%，平均回收率为99.15%(表2)。