梁晓玲 马利 赖月花 侯连兵

摘 要 目的：研究蛇葡萄素F（AMPF）对脂多糖（LPS）致炎模型细胞的抗炎作用及其机制。方法：以RAW264.7细胞为模型细胞，采用CCK-8法测定不同质量浓度（100、40、20、10、5 μg/mL）的AMPF处理不同时间（24、48、72 h）后的细胞活性。设正常对照组、模型组和AMPF高、中、低剂量组（40、20、10 μg/mL），分别未加药物处理或加入相应质量浓度的AMPF溶液处理后培养24 h[除正常对照组外，其余各组均在培养1 h时加入LPS（1 μg/mL）致炎造模]。测定各组细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和一氧化氮（NO）的含量，以及环氧合酶2（COX-2）和一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表达水平。结果：当培养时间为24 h时，AMPF各质量浓度组（100、40、20、10、5 μg/mL）细胞存活率均高于90%，AMPF未对细胞产生明显毒性。与模型组比较，AMPF高、中、低剂量组细胞中IL-1β的含量和iNOS的蛋白表达水平均显著降低，高剂量组细胞中IL-6、TNF-α、NO的含量均显著降低，高、中剂量组细胞中COX-2的蛋白表达水平均显著降低，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01），并呈现一定的剂量依赖性。结论：AMPF对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症具有显著的抑制作用，其机制可能与AMPF調控COX-2和iNOS的表达，进而抑制NO的释放，降低IL-1β、IL-6和TNF-α的含量有关。

关键词 蛇葡萄素F；RAW264.7细胞；脂多糖；炎症；炎症因子

中图分类号 R285 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）14-1927-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.14.13

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the anti-inflammatory effect of ampelopsin F （AMPF） on lipopolysaccharide （LPS）-induced inflammatory model cells and its mechanism. METHODS： Using RAW264.7 cell as model cell， CCK-8 assay was used to determine the activity of cell after treated for different duration （24， 48， 72 h） with different concentration （100， 40， 20， 10， 5 μg/mL） of AMPF. Then the cells were divided into control group， model group and AMPF high-dose， medium-dose and low-dose groups （40， 20， 10 μg/mL）. They were cultured without or with relevant AMPF solution for 24 h [Except for normal control group， other groups received LPS （1 μg/mL） to induce inflammatory model after cultured for 1 h]. The contents of IL-1β， IL-6， TNF-α and NO， the protein expression of COX-2 and iNOS were detected in cell culture supernatant. RESULTS： After cultured for 24 h， survival rates of cells in AMPF groups （100， 40， 20， 10， 5 μg/mL） were all higher than 90%， showing no obvious cytotoxicity of AMPF. Compared with model group， the content of IL-1β and the protein expression of iNOS were decreased significantly in AMPF high-dose， medium-dose and low-dose groups； the contents of IL-6， TNF-α and NO were decreased significantly in AMPF high-dose group； the protein expression of COX-2 were decreased significantly in AMPF high-dose and medium-dose groups， with statistical significance （P<0.05 or P<0.01）， in dose-dependent manner. CONCLUSIONS： AMPF shows significant anti-inflammatory effect on LPS-induced RAW264.7 cell inflammation， the mechanism of which may be associated with regulating the expression of COX-2 and iNOS， inhibiting the release of NO and decreasing the contents of IL-1β， IL-6， TNF-α and NO.

KEYWORDS Ampelopsin F； RAW264.7 cells； Lipopolysaccharide； Inflammation； Inflammatory factor

金刚藤又名菝葜，为百合科植物菝葜（Smilax china L.）的根茎，具有祛风、活血、解表、收敛止血等功效[1]；其相关制剂用于慢性盆腔炎的临床治疗效果也得到了证实[2]。本课题组前期研究发现，金刚藤总黄酮提取物对慢性盆腔炎模型大鼠具有良好的药效[3-4]。Jin Q等[5]从金刚藤总黄酮提取物中分离出多个单体成分，蛇葡萄素F（Ampelopsin F，AMPF）作为其中具有抗慢性盆腔炎作用的单体化合物之一，已被证实具有抗氧化活性。但关于AMPF的药理药效学等方面的研究报道甚少。小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7具有免疫调节作用，常作为免疫相关研究的模型细胞系[6]。……