郑玲利 袁明勇 蒋婷 王峰 张维 陈静

中图分类号 R974+.3；R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）09-1264-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.09.27

摘 要 目的：建立测定人血清中多索茶碱浓度的方法。方法：采用在线二维柱切换-高效液相色谱法测定人血清中多索茶碱浓度，一维色谱柱为Waters C18，中间柱为SC2，一维、二维柱流动相均为甲醇-水（70 ∶ 30，V/V），检测波长为273 nm，柱温为40 ℃，进样量为10 ?L。结果：多索茶碱在0.5～50.00 ?g/mL质量浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9），检测限为0.01 ?g/mL，定量限为0.5 ?g/mL，日内、日间精密度的RSD分别为1.51%～1.89%和1.52%～1.92%（n=5），准确度为97.91%～104.19%（n=5），提取回收率为91.63%～93.44%（RSD<2.00%，n=3），基质效应RSD≤3.01%（n=6），稳定性的RSD<5.00%（n=6）。3例患者静脉输注多索茶碱葡萄糖注射液（0.3 g/d）达稳态后，次日给药前静脉血清中多索茶碱的浓度为3.23、3.35、3.68 ?g/mL，RSD为2.28%、2.34%、2.14%（n=5）。结论：该方法简便、快速、准确，适用于临床多索茶碱的血药浓度检测。

关键词 多索茶碱；血药浓度；在线二维柱切换-高效液相色谱法

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish the method for the determination of doxofylline in human serum. METHODS： Online two-dimensional column switching-HPLC was adopted to determine the concentration of doxofylline in human serum. First- dimensional chromatographic column was Waters C18 column， and middle column was SC2. First-dimensional and second- dimensional column mobile phrase were methanol-water （70 ∶ 30， V/V）. The detection wavelength was 273 nm， and column temperature was 40 ℃. Sample volume was 10 ?L. RESULTS： The linear range of doxofylline were 0.5-50.00 ?g/mL （r=0.999 9）， and the detection limit was 0.01 ?g/mL. The quantitative limit was 0.5 ?g/mL. RSDs of intra-day and inter-day were 1.51%-1.89% and 1.52%-1.92% （n=5）. The accuracy were 97.91%-104.19% （n=5）. Extraction recoveries rate were 91.63%-93.44%（RSD<2.00%，n=3）. RSD of matrix effect were lower than or equal to 3.01% （n=6）， and RSD of stability test was lower than 5.00% （n=6）. After 3 patients were given intravenous injection of Doxofylline and glucose injection（0.3 g/d） up to steady state， the serum concentrations of doxofylline were 3.23， 3.35， 3.68 ?g/mL before medication on the next day （RSD=2.28%， 2.34%， 2.14%， n=5）. CONCLUSIONS： The method is simple， rapid， accurate and suitable for the determination of plasma concentration of doxofylline.

KEYWORDS Doxofylline； Plasma concentration； Online two-dimensional column switching-HPLC

多索茶堿（Doxofylline）为甲基黄嘌呤的衍生物[1]，主要用于支气管痉挛引起的呼吸困难[2]。作为新一代茶碱药物，该药具有疗效高、副作用小等特点，故越来越被临床所重视。但该药与茶碱一样，同样存在个体差异较大，大剂量给药时可能引起血压下降、心律不齐、阵发性痉挛等[3]，故临床需密切监测多索茶碱血药浓度，防止过量导致不良反应的发生。目前，检测血药浓度主要采用高效液相色谱（HPLC）法[4-5]，但传统的HPLC法存在前处理较复杂、常使用大量有机溶剂、残留蛋白易堵塞色谱柱等问题。本研究通过对传统血药浓度检测方法进行优化和改良，建立了一种简便、快速、准确的检测方法，适用于临床多索茶碱的血药浓度检测。

1 材料

1.1 仪器

二维HPLC（2D-HPLC）由FLC-2801全自动二维液相色谱耦合仪（湖南德米特仪器有限公司）和LC-20A色谱模块（日本岛津公司）构成；HR-200电子分析天平（日本AND公司）；TD24-WS低速离心机（长沙平凡仪器仪表有限公司）；……