顾金霞 张振新 黄华

（1南通市中医院耳鼻咽喉科 江苏 南通 226001）

（2南通大学附属医院耳鼻咽喉科 江苏 南通 226001）

（3南通大学附属医院病理科 江苏 南通 226001）

缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）作为目前唯一一个已发现的在特异性缺氧状态下，能够发挥活性的转录因子。CD105是一种在新生血管内皮细胞高表达，参与肿瘤新生血管生成的相关蛋白。本研究运用免疫组化方法检测50例喉鳞癌标本中的HIF-1α和CD105的表达水平，探究两因子在喉癌患者机体中的表达关系及其对该疾病产生的影响。

1.资料与方法

1.1 一般资料

本研究所用病例来自南通大学附属医院耳鼻喉头颈外科2002～2009年间喉癌术后石蜡标本（术后病理诊断为鳞状细胞癌）且临床资料齐备者50例，所有患者在术前均未行放、化疗治疗。患者年龄32～78岁，平均年龄61岁，其中男性49例，女性1例。喉癌按照2002年AJCC/UICC（美国癌症联合会/国际抗癌协会）制定的标准进行分期T1N0M0 8例；T2N0M0 27例；T2N2M0 1例；T3N0M0 9例；T3N1M0 4例；T3N2 M0 1例。组织学分型为：高分化22例，中分化25例，低分化3例。其中伴有淋巴结转移者6例，无淋巴结转移者44例。另取10例癌旁组织作对照。

1.2 方法

1.2.1 试剂 鼠抗人HIF-1α、CD105单克隆抗体及试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。

1.2.2 免疫组化SP检测 每例标本分为两份，按试剂盒说明检测HIF-1α和CD105的表达。由试剂公司提供阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。DAB显色切片结果用彩色病理图像分析系统采集。

1.2.3 结果判断 所有切片均采取双盲法由两位病理医师观察诊断。

（1）参照Aebersold等[1]的方法对HIF-1α结果结果进行判定，阳性结果表现为细胞核或细胞浆内，出现棕黄色颗粒，综合染色强度及阳性细胞占总细胞数的百分比采用半定量处理，具体标准为：未见阳性染色记0分；阳性细胞比例≤1%记1分；阳性细胞比例占其1%～10%且呈或轻、中度染色，或阳性细胞比例占10%～50%，且呈轻度染色记2分；阳性细胞比例占10%～50%且呈中、强度染色记3分；阳性细胞比例＞50%且呈中、强度染色记4分。其中：0～2分为低表达，3～4分为高表达。

（2）参照Weidner[2]微血管计数方法，CD105阳性表现为血管内皮细胞胞浆呈棕黄色。且全部染色为棕黄色的内皮细胞或细胞簇，均作为一个微血管计数。首先在100镜下，寻找瘤内微血管较为密集的区域，然后调至400倍镜，并对其中的微血管数目进行记录，共观察5个高倍视野，其微血管数（MVD）为各视野数据的平均值。

1.3 统计学处理

统计软件使用SPSS13.0软件包处理。P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

HIF-1α阳性染色主要定位于肿瘤细胞胞浆，表现为阳性细胞成团分布。HIF-1α蛋白在鳞状细胞癌中的阳性表达率为86.00%（43/50），其中低表达52.00%（26/50），高表达48.00%（24/50）。正常对照组中10例仅1例表达，阳性率10%。两者间比较有显著差异（P＜0.01）。CD105主要在表达于喉鳞癌组织的微血管内皮细胞胞浆中，大血管染色不明显，染色呈现浓重的棕色。50例喉癌标本中，CD105标记的微血管密度（MVD）平均值是15.0±3.78，在对照组中未有表达，比较有显著差异（P＜0.01）。

HIF-1α在病理分级中以中分化组表达率高，差异显著（P＜0.05），在淋巴结转移、T分期无显著差异（P＞0.05）。CD105在喉癌侵犯程度高（T3期）表达率高，差异显著（P＜0.05），在淋巴结转移、病理分级无显著差异（P＞0.05）（表1）。

表1 HIF-1α、CD105与喉鳞癌临床病理特征间的关系

在喉鳞癌组织中，HIF-1α表达强度与CD105-MVD表达呈正相关（P＜0.05）HIF-1α表达强度与CD105-MVD表达（表2）。

表2 HIF-1α蛋白的表达与CD105-MVD的关系

3.讨论

肿瘤细胞逐渐适应缺氧适应及其血管生成，使其发生及发展的关键步骤。本研究显示HIF-1α在病理分级中以中分化组表达率高，差异具显著统计学意义，提示HIF-1α在喉鳞癌发生及发展过程中具有重要作用。与对照组相比，HIF-1α在喉鳞癌组织中表达具有显著性，这一结果在其他肿瘤组织中表达类似，表明细胞缺氧情况在恶性肿瘤的发展中较为普遍。而其血管生成的数量主要可通过对微血管密度（MVD）进行检测来评估[3]。本研究表明CD105在正常喉粘膜血管上不表达，与喉鳞癌组织中表达有显著差异提示CD105强表达于高度增生的血管内皮细胞，因而被认为是新生血管的标志[4]。本研究显示CD105在喉癌侵犯程度高（T3期）表达率高，组间差异具显著统计学意义，一定程度上表明了CD105在喉鳞癌发生、浸润过程中有着重要作用。国内学者研究结直肠癌中HIF-1α的表达情况得出HIF-1α的表达与MVD相关。目前在喉鳞癌中HIF-1α和肿瘤血管生成的关系的研究较少，而用CD105标记喉鳞癌的微血管密度就更为少见。本研究显示HIF-1α蛋白在喉鳞癌组织中的高表达与CD105的表达呈正相关。两者在喉鳞癌发生、发展中可能起协同作用。未来需进一步研究HIF-1α和CD105在分子水平乃至基因水平的调控机制与关联。如能在喉癌发生过程中进一步探明两因子之间的调控机制与关联，则针对HIF-1α和CD105的靶向治疗将成为喉癌综合治疗的新亮点。