商陆离体再生体系的构建
2018-09-03邓雯韬肖英粟蔺万煌
激光生物学报 2018年3期
关键词:生长
邓雯韬,田 宇,谢 琴,肖英粟,苏 益,蔺万煌
(湖南农业大学植物激素与生长发育湖南省重点实验室,湖南 长沙 410128)
商陆(PhytolaccaacinosaRoxb) 为商陆科商陆属多年生宿根草本植物,是一种传统的药用植物[1-3],也被用于环境修复[4-7]、病虫害防治[8]和印染业[9]等多个领域。我国野生商陆资源丰富,分布广泛,具有很高的利用和开发价值。商陆具有富集土壤中多种金属离子的作用[10-16],利用商陆矿质营养遗传资源对改善作物营养特性和土壤修复具有重要意义。开展商陆离体再生体系研究,为商陆矿质营养相关基因功能分析及其遗传转化体系的构建奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
商陆种子的采集,于2016年秋季在湖南农业大学校园周边荒地采集成熟的商陆浆果,置于水盆中用纱布将浆果中的种子挤出,弃果皮和上浮的种子,收集下沉饱满的种子于自然条件下风干,存放4 ℃冰箱中保存备用。
1.2 试验方法
1.2.1 离体培养条件
试验以 MS 为基本培养基,根据试验目的分别添加不同浓度的植物生长调节剂组合。培养基中琼脂浓度为0.7%-0.8%,蔗糖浓度为3%,pH为5.8。经121 ℃高压湿热灭菌25 min,培养瓶为100 mL三角玻璃瓶,培养温度为(23±2)℃,光照强度为2 000 Lx,每天光暗周期为14 h/10 h。
1.2.2 外植体的获取
参考吴豪杰等的方法[17],取成熟饱满的商陆种子,用浓硫酸浸泡处理15 min后,以无菌水冲洗4~6次以除去残留的硫酸,再将种子接种于含MS培养基的培养皿中发芽。首先在黑暗条件下培养3 d,种子萌发后再置于光照下培养2~3周,获得六叶期的无菌苗作为商陆离体培养的外植体。……
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