荆明龙，李敏，王小凤，李明奇，霍凤娇，张豫，刘良波，张静，张辉*

（石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832000）

布鲁氏菌是一种短杆状革兰氏阴性胞内寄生菌，宿主细胞为巨噬细胞或胚胎滋养层[1]，可以广泛引起人和哺乳动物睾丸炎、附睾炎、流产等疾病，给畜牧业发展造成严重的经济损失。布鲁氏菌通过细胞膜的脂筏(Lipid rafts)进入宿主细胞[2]，形成布氏小体，布氏小体酸化，避免被溶酶体杀伤，在胞内生存[3-4]。布鲁氏菌的感染会引起宿主体内广泛的病理变化，布鲁氏菌会随着巨噬细胞在循环系统的循环而滞留在肝、脾、骨髓、淋巴结等处，进而引起这些器官的炎症反应。动物实验已经证明NF-κB在炎症相关的肿瘤发展中发挥重要作用[5-6]，其过度表达会导致机体炎症反应及组织病理损伤。

核转录因子kapaB(NF-κB)是近年发现的与多种炎性因子调控相关的转录因子。NF-κB家族包括NF-κB1(P50)、NF-κB2(P52)、RelA(P65)、RelB 和c-Rel 5个成员[7]。静息状态下NF-κB以同源或异源二聚体形式存在，与iκB结合并存在于胞浆中[8]。参与细胞周期的调节，当细胞受到刺激后，NF-κB可被活化，迅速由细胞质转入细胞核，与DNA的靶向相关序列相结合，调节相应基因转录是一种急性期蛋白的基因转录[9]。不同的NF-κB成员相互结合成不同同源或异源二聚体，其中最重要的是p50/p65异源二聚体，因此被称为通常所说的NF-κB[10]。

本实验采用的LipofectamineTM 2000阳离子脂质体将siRNA和shRNA转染进RAW264.7细胞，使用实时荧光定量的方法检测NF-κB P65相对表达量。筛选干扰效率较高的靶向小鼠P65基因的小干扰RNA，并利用慢病毒表达载体pLL3.7-shRNA系统，构建可在RAW264.7细胞中表达相应NF-κB P65 shRNA的慢病毒，以期为进一步研究沉默P65对NF-κB产生炎症影响奠定基础。……