猪圆环病毒2型（Porcine drcovirus type 2，PCV2）可导致动物机体免疫系统功能严重受损，形成免疫抑制，增强对其它多种病原体的易感性，使猪群发生难以控制的复发性疾病和多重感染。目前该病呈全球性流行，给养猪业造成巨大经济损失。疫苗生产时的培养方式依然延用了传统的转瓶培养方式，工序操作繁琐，批间与瓶间细胞生长状态的差异导致PCV病毒滴度的不稳定。

生物反应器微载体悬浮培养其营养物质的传递更加充分均匀，细胞生长及病毒增殖的培养环境相对优质、恒定，整个培养过程控制精确，易于重复，疫苗产品质量均一性高等独特优势，受到越来越多疫苗企业关注。本研究使用7L生物反应器进行PCV2的培养，旨在进行生物反应器微载体培养PCV工艺的摸索，为进一步使用大容积生物反应器微载体进行PCV的培养奠定基础。

一、材料与方法

1.细胞、种毒及微载体。PK-15细胞为哈药集团生物疫苗有限公司保存；PCV2-LG株为哈尔滨兽医研究所猪病研究室提供；Cytodex 1微载体购自美国GE公司。

2.主要试剂及仪器。胎牛血清购自美国CLARK公司；DMEM培养基购自美国GIBCO公司；7L细胞生物反应器购自荷兰Applicon公司；猪圆环病毒2型抗原检测试剂盒购自哈尔滨兽医研究所；其余试剂为分析纯。

3.PK-15细胞微载体培养。将处于对数生长期的PK-15细胞用胰酶消化脱壁，加入含10%新生牛血清的MEM营养液重悬并计数。在250 ml搅拌瓶中分别加入浓度为1、3和5 g/L的微载体（按照产品说明书进行水化及灭菌处理），细胞初始接种密度为0.3×106cells/ml，每天取……