王永娟

摘 要：脐血作为一种造血干细胞来源可替代骨髓进行造血干细胞移植， 脐血移植在治疗儿童遗传性疾病和血液病方面取得了巨大的成效。为进一步推广脐血移植，必须相应地建立起完备的脐血库。脐血库不同于骨髓库， 它必须冻存实物。为减少冻存体积， 降低成本， 需要采取有效的方法分离脐血中有核细胞， 从而使大规模、广泛地建立脐血库成为可能。本文对脐血造血干细胞分离进行实验研究分析。

引言

脐带血（umbilical cord blood，UCB） 是产后留存在胎盘和脐带中的血液， 以往被作为医学废物而丢弃。近十几年的研究发现，人脐带中存在大量间充质干细胞，间充质干细胞（mesenchymal sterncells，MSCs）是成体干细胞的一种，具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能， 可以重建人体造血和免疫系统的造血干/祖细胞， 可用于造血干细胞移植，治疗多种疾病。

一、试验方法

1.1脐带血造血干细胞分离

利用离心沉降法和自然沉降法分离脐带血有核细胞，计算有核细胞回收率和红细胞回收率，比较两种分离方法的分离效果。

离心沉降法：将6%的羟乙基淀粉注射液和脐带血按照1∶5的比例混合，慢速摇匀10min，以50g、10℃离心7min，收集上层富白细胞血浆，再以400g、10℃离心15min，去除血浆。

自然沉降法：将6%的羟乙基淀粉注射液和脐带血按照1：5的比例混合，慢速摇匀10min，悬挂让其内细胞自然沉降1h后，收集上层富白细胞血浆，同样以400g、10℃离心15min，去除血浆。

1.2脐带血造血干细胞冻存

将分离后的脐带血分别与4种不同的冷冻保护剂混合，脐带血与冷冻保护剂的体积比为4∶1，混合时应将冷冻保护剂缓慢注入脐带血中，边注入边晃动。……