赵小琪，黄英，杨明华，潘洪彬，赵素梅



真核表达载体pIRES2-AcGFP1-PLIN2的构建及其在3T3-L1前脂肪细胞中的表达

赵小琪，黄英，杨明华，潘洪彬，赵素梅通信作者

（云南农业大学 动物营养与饲料重点实验室，昆明 650201）

构建pIRES2-AcGFP1-PLIN2真核表达载体，并观察其在3T3-L1前脂肪细胞中的转染状况。采用分子克隆技术，将PLIN2基因连接到pMD18-T载体中做Ⅰ/I双酶切，将酶切产物回收并将双酶切后的目的片段与pIRES2-AcGFP1载体连接，转入DH5α感受态细胞，并提取pIRES2-AcGFP1-PLIN2阳性重组质粒，转染到3T3-L1前脂肪细胞，显微镜观察转染情况。本研究成功克隆出了PLIN2基因，同时成功构建了pIRES2-AcGFP1-PLIN2真核表达载体，并在3T3-L1前脂肪细胞中成功表达，于显微镜下观察到绿色荧光，试验为进一步研究PLIN2基因对脂肪细胞的调控机理奠定了基础。

乌金猪；PLIN2基因；真核表达载体

脂滴相关蛋白存在于脂滴表面，这些蛋白调节着脂滴中脂肪的合成与分解代谢。其中，PAT 家族是最重要的脂滴相关蛋白，脂肪分化相关蛋白（perilipin 2，PLIN2）属于PAT家族成员之一[1]。研究发现，PLIN2基因可促进脂滴的形成，同时能通过阻碍脂肪细胞甘油三酯水解酶（ATGL）与脂滴表面接触实现屏障功能[2]。猪是研究脂肪代谢最佳的模式动物之一，构建猪PLIN2基因的真核表达载体对研究脂肪细胞内脂类代谢机制具有重要作用。

本研究通过分子克隆技术，克隆了乌金猪PLIN2基因，成功构建了pIRES2-AcGFP1- PLIN2真核表达载体，并在3T3-L1前脂肪细胞中成功表达，为进一步研究PLIN2基因对脂肪细胞的调控机理奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

选择健康、胎次相近、体重达100 kg的乌金猪6头，公母各半，屠宰，取背最长肌相同部位的肌肉于-80 ℃保存备用。……