钱 涛 李昌阳

江苏省中西医结合医院 江苏 南京 210028

本文旨在探讨清胰汤与善宁联用对重症急性胰腺炎的作用及机制，为中医药的推广提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料：牛黄胆酸钠购自Sigma公司，清胰汤由柴胡、白芍、黄连、延胡索、生大黄各15g，黄芩、木香、芒硝各10g组成，由江苏省中西医结合医院中药房煎煮浓缩至每ml相当于1g生药。组织裂解液购自碧云天，COX-2兔抗大鼠多克隆抗体、β-act in小鼠抗大鼠多克隆抗体、HRP标记的羊抗小鼠二抗、HRP标记的羊抗兔二抗、IL-6 ELISA试剂盒均购自南京拓科达生物科技有限公司，ECL化学发光试剂盒购自Phar macia公司。

1.2 动物分组及处理：普通级Wist ar大鼠，雌雄各半，50只（南京青龙山繁殖场提供），体重250±50g，随机分为5组：假手术组（SO组）；重症急性胰腺炎组（SAP组）；清胰汤组（QY组）；善宁组（SN组）；清胰汤联合善宁组（QY＋SN组）。SO组开腹后轻挑十二指肠，然后关腹。SAP组、QY组、SN组和QY＋SN组均制作SAP模型。在造模成功后，QY组立即胃注清胰汤（10ml/kg），SN组立即皮下注射善宁（16μg/kg），QY+SN组立即等量胃注清胰汤和皮下注射善宁，各组6h和12h后分别再次给药，SO组和SAP组予以等量生理盐水处理。术后24h心脏取血处死大鼠，收集血样，液氮保存胰腺标本。

1.3 动物模型建立：采用文献方法[1]建立SAP模型。

1.4 检测指标和方法：血清淀粉酶（AMY）用10ml注射器刺入心脏采血4～8ml,不加抗凝剂,血凝后4℃下3000r/min离心10min,取血清不少于0.5ml，采用全自动生化分析仪器测定。胰腺组织COX-2蛋白质表达水平的检测：采用west ern bl ot法测定。用组织细胞裂解液按说明书要求在玻璃匀浆器中研磨胰腺组织，提取组织总蛋白，按5∶1的比例加入6×l oading buf f er，煮沸5～10min，电泳分离蛋白、转膜、封闭，依次加一抗（COX-2兔抗大鼠多克隆抗体，β-act in小鼠抗大鼠多克隆抗体，工作浓度分别为1∶200、1∶400），二抗（HRP标记的羊抗兔二抗，工作浓度l∶2000,HRP标记的羊抗小鼠二抗，工作浓度1∶5000），ECL发光法检测，显影于柯达胶片，用COX-2与β-act in的灰度密度比值表示结果。血清IL-6表达检测：按上述方法取血清液，按照ELISA试剂盒进行操作。胰腺病理学表现：中性甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色，高倍镜下观察组织结构变化，并参照Amy法进行评分。

1.5 统计学方法：采用SPSS 17.0软件进行统计分析，所有数据均采用均数±标准差（）表示，多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），两两比较方差齐时采用 LSD（Last Signif icant Dif f er ence）法检验，方差不齐采用Dunnett T3方法。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 血清AMY水平：各组别间比较，血清AMY水平差异有统计学意义：与SO组的血清AMY水平相比，其余各组血清AMY水平均升高（P＜0.01）；QY组和SN组单给药治疗后血清AMY水平较SAP组降低（P＜0.01）；QY＋SN组血清AMY水平又较单给药组降低（P＜0.01）。见表1。

表1 各组大鼠血清 AMY水平（，U/L）

表1 各组大鼠血清 AMY水平（，U/L）

注：与SO组比较，a P＜0.01；与SAP组比较，bP＜0.01；与QY组和SN组比较，c P＜0.01。

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2.2 COX-2和IL-6的水平：与SO组相比，其余各组胰腺COX-2蛋白质的表达和血清IL-6水平均升高（P＜0.01）；与SAP组相比，QY组和SN组胰腺COX-2蛋白质的表达和血清IL-6水平均降低（P＜0.01或P＜0.05）；与单给药组相比，QY＋SN组胰腺COX-2蛋白质的表达和血清IL-6水平进一步降低，差异均有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。见表2、表3。

表2 COX-2蛋白半定量值（cox-2/β-act in比值）（)

表2 COX-2蛋白半定量值（cox-2/β-act in比值）（)

注：与SO组比较，a P＜0.01；与SAP组比较，b P＜0.01；与QY组和SN组比较，c P＜0.01。

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表3 IL-6检测值（，ng/L）

表3 IL-6检测值（，ng/L）

注：与SO组比较，a P＜0.01；与SAP组比较，b P＜0.01；与QY组和SN组比较，c P＜0.01。

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2.3 病理损伤程度：分述如下。

2.3.1 肉眼观察：术后24h剖腹观察，SO组大鼠胰腺肉眼观光泽度好，无水肿，腹腔内少量清亮腹水。SAP组胰腺水肿、出血明显，胰腺及网膜组织大量皂化斑，血性腹水形成，胃肠扩张，明显充血。QY组和SN组，胰腺损害较SAP组减轻,QY＋SN组病损程度进一步减轻。

2.3.2 电镜下观察：术后24h剖腹观察，SO组大鼠的胰腺组织结构清晰，细胞形态正常，间质无明显水肿，无炎性细胞浸润，无出血坏死。SAP组大鼠的胰腺可见间质明显充血水肿，间质增宽，有渗出物，腺泡细胞结构模糊；间质及腺泡大量炎性细胞浸润及出血，可见微血栓形成；大片组织坏死。QY组和SN组症状有所减轻，QY＋SN组进一步减轻。

2.3.3 损伤评分：SAP组大鼠的胰腺组织病理损害评分显著高于SO组(P＜0.01)，QY组和SN组胰腺病理损害评分减轻，QY＋SN组进一步减轻(P＜0.01)。见表4。

表4 大鼠胰腺病理损害评分（，分)

表4 大鼠胰腺病理损害评分（，分)

注：与SO组比较，a P＜0.01；与SAP组比较，b P＜0.01；与QY组和SN组比较，c P＜0.01。

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3 讨论

清胰汤化裁于大承气汤，方中大黄、芒硝攻里通下，泻三焦之热；柴胡、白芍、木香调气疏肝，缓急止痛；黄芩、黄连清肝胃之热，延胡索活血行气。全方疏肝理气，清热利湿，通里攻下，活血化瘀解毒。善宁是一种人工合成的8肽生长抑素类似物，具有显著抑制肠肽释放及胃肠、胰内外分泌的功能。具有刺激胰腺细胞修复的作用，目前临床上已常规应用于急性胰腺炎的治疗。

本实验发现：SAP大鼠血清淀粉酶水平、COX-2和IL-6的表达明显高于SO组，我们应用清胰汤和善宁治疗后，血清淀粉酶水平、COX-2和IL-6的表达均降低，清胰汤联合善宁治疗后发现各水平进一步降低。在病理损伤评分方面，变化趋势与上述变化趋势一致，清胰汤和善宁单给药治疗，病理学评分均降低，两者联合治疗后病理损伤和评分进一步减轻。所以本研究提示，清胰汤和善宁均能有效地减轻SAP大鼠胰腺的损伤，但两者联合治疗的效果明显优于单药使用，其治疗机制可能与抑制炎症因子释放有关，从而减轻胰腺组织的损伤。这为中西医结合治疗胰腺炎提供了理论依据。