林高阳，高大登，袁方，刘振波

(青岛大学附属青岛市海慈医疗集团，山东青岛266033)

聚合酶链式反应(PCR)是一种体外酶促合成、扩增特定基因或DNA片段的方法，已在多个领域得到广泛应用，如基因分离、克隆、核酸序列分析、胎儿性别鉴定、癌症治疗监控、基因突变检测等。近年来，基础医学对转化生长因子β(TGF-β)/SMAD信号通路及SMAD基因家族与各种疾病的研究不断升温，SMAD基因家族的PCR检测技术应用也更加广泛。引物设计是影响PCR试验的重要参数之一，一对高度有效的基因引物序列可以更好地检测基因表达变化。目前，虽然引物设计软件的功能趋于完善，但关于计算机引物设计程序的文献还不多。2017年1～12月，本研究以SMAD基因家族引物设计为例，对引物设计原则和软件引物设计的方法进行了分析，同时应用RT-PCR技术检测SMAD基因家族在人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B和非小细胞肺癌A549、SK-MES-1、H1299中的表达变化，旨在为进一步研究SMAD基因提供条件。

1 材料

人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B，肺腺癌细胞系A549、H1299，肺鳞癌细胞系SK-MES-1均购自美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection. ATCC，Manassas, VA, USA)；TRIzol购自美国Invitrogen公司；逆转录试剂盒和实时荧光定量PCR检测试剂盒购自TaKaRa生物科技公司；SMAD基因家族引物自主设计，碱基序列由华大生物科技有限公司合成，应用Applied Biosystems(ABI)7900 Fast Real-Time PCR System进行检测。

2 方法与结果

2.1 SMAD基因家族(SMAD1～SMAD8)特异引物设计及验证 在NCBI数据库中搜索SMAD1～SMAD8基因序列，应用Premier Primer5.0软件，按照引物设计的基本原则进行引物设计。引物设计流程：获取SMAD基因序列(NCBI、Gramene、EBI等)；序列编辑与整理(明确SMAD家族成员的可变剪切体数目)；……