杨惠辛，车奇涛，葛晓瑾，陈随清

(河南中医药大学药学院，河南 郑州　450046)

光皮木瓜[Chaenomelessinensis(Thouin) koehne]为蔷薇科木瓜属植物木瓜的成熟果实，又名榠楂、土木瓜，其果实形状呈长椭圆形或椭圆形，外皮光滑，果肉味酸、涩，性平，归胃、肝、肺经，具有利胃舒筋、祛风湿和消痰止咳的功效[1-2]。木瓜果皮干燥后仍光滑，不皱缩，故有光皮木瓜之称。本品使用历史较久，又有大面积的栽种，曾载入《河南中药材标准》[3]。光皮木瓜的功效与药用皱皮木瓜相近，在临床上应用广泛，与多种中药配伍使用治疗疾病的疗效均较好[4]。为了进一步了解光皮木瓜的化学成分及其药理活性，曾小威等[5]总结了1990—2015年有关木瓜(包括光皮木瓜)中单体化合物及其药理作用，主要论述了木瓜中的糖类、黄酮类、有机酸、萜类、挥发油成分和生物酶类化学物质。随着光皮木瓜研究的逐渐深入，新的化学成分被发现。近几年研究发现，光皮木瓜还含有氧化脂类、木脂素苷类和联苯类等化学成分，其具有调节免疫功能、降血糖、抗氧化、抗肿瘤、抗菌消炎、抗流感病毒及抗过敏反应等多种药理学活性[6]。贾波等[7]测定了光皮木瓜中维生素C、蛋白质、糖酸、膳食纤维、氨基酸及矿质元素的含量，确定了其具有较高的食用营养价值。本研究通过顶空粉末进样，气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)对光皮木瓜的香气成分进行分析，操作简单方便并节省药材，无需使用有机溶剂，减少了对仪器的损坏；进一步确定了光皮木瓜香气中的化学成分组成，进一步说明了光皮木瓜的功效和药用价值。

1　材料

1.1　仪器

TSQ8000EVO型三重四极杆气质联用仪(美国赛默飞世尔公司)；FE20 K型pH计(梅特勒-托利多公司)；KQ-500DV型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BSA124S型万分之一分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；DGX-9143B型电热恒温鼓风干燥箱(上海南荣实验室设备有限公司)。

1.2　药品与试剂

齐墩果酸对照品(批号：110709—201304)、熊果酸对照品(批号：110742—201421)均购自中国食品药品鉴定研究院；木瓜样品产自于河南南阳地区，经河南中医药大学陈随清教授鉴定为蔷薇科木瓜属植物光皮木瓜Chaenomelessinensis(Thouin)koehne；木瓜对照药材(来源：现行药典规定的木瓜药材为皱皮木瓜，批号：121003—201206)；三氯甲烷、甲醇及其他有机试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1　性状鉴别

光皮木瓜切片呈半圆形或圆弧形，长4～7 cm，宽1～3 cm，厚0.4～0.6 mm，果肉黄白色至黄棕色，外果皮黄棕色至棕褐色，表面光滑。果肉目视有众多细小颗粒，摸之有强烈粗糙沙砾感。种子6～9枚，呈长三角形，多脱落。质坚硬。气微清香，味酸。

2.2　显微鉴别

本品粉末为黄棕色至棕红色，石细胞较多，成群或散在，无色、淡黄色或橙黄色，圆形、长圆形或类多角形，直径 20～82 μm，层纹明显，孔沟细，胞腔含棕色或橙红色物。网纹、螺纹导管直径5～27 μm。外果皮细胞多角形或类多角形，直径10～35 μm，胞腔内含棕色或红棕色物。中果皮薄壁细胞，淡黄色或浅棕色，类圆形，皱缩，偶含细小草酸钙方晶，见图1。

1.石细胞；2.导管；3.中果皮薄壁细胞；4.外果皮细胞1.stone cells; 2.catheters; 3.peeled parenchyma cells; 4.epidermal cells图1　光皮木瓜粉末显微图Fig 1　Powder micrograph of chaenomeles sinensis koehne

2.3　理化鉴别

取本品粉末1.00 g，加三氯甲烷10 ml，超声处理(功率：300 W，频率：40 kHz)30 min。滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇-三氯甲烷(V∶V=1 ∶3)混合溶液2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取木瓜对照药材0.50 g，同法制成对照药材溶液。再取熊果酸对照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(V∶V∶V∶V=6 ∶0.5 ∶1 ∶0.1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，分别置于日光和紫外灯(365 nm)下检视。供试品在与对照品相应的位置上显相同的紫红色斑点和橙黄色荧光斑点，在与对照药材相应的位置上显斑点并没有完全对应，木瓜对照药材斑点较多，见图2。

A.日光；B.紫外灯;1.对照品溶液；2.对照药材溶液；3—5.供试品溶液A.sunlight；B.ultraviolet lamp; 1.reference solution; 2.control materials solution; 3—5. test solution图2　光皮木瓜薄层色谱鉴别Fig 2　TLC identification of chaenomeles sinensis koehne

2.4　水分、总灰分、pH及浸出物检查

参照《中华人民共和国药典》(2015年版)测定光皮木瓜的水分、总灰分、酸度及醇溶性浸出物，结果见表1。

表1　光皮木瓜水分、总灰分、pH及浸出物测定结果(n=6)Tab 1　Determination results of the moisture, total ash, pH and extraction (n=6)

2.5　香气成分分析

2.5.1香气成分的采集：取光皮木瓜粉末0.3 g，精密称定，置于10 ml顶空瓶中密封，放入自动顶空进样器中进样。

2.5.2顶空条件：样品瓶平衡温度120 ℃；样品环温度140 ℃；传输线温度160 ℃；样品瓶平衡时间30 min，样品环平衡时间0.2 min，进样时间0.5 min[8]。

2.5.3GC-MS分析条件：(1)气相色谱条件：色谱柱为TG-5MS柱(0.25 μm×250 μm×30 m)，进样口温度280 ℃，载气为高纯氦气，柱流量1.2 ml/min，分流比为10 ∶1。程序升温条件为初始温度40 ℃，保持3 min，以8 ℃/min升至150 ℃，保持5 min，最后以15 ℃/min升到260 ℃，保持5 min。(2)质谱条件：电子轰击离子源，电子能量70 eV。离子源温度为250 ℃，传输线温度为260 ℃。数据采集扫描模式为全扫描，质量扫描范围(m/z)为30～450 amtl；溶剂延迟2 min。

2.5.4结果：按照“2.5.3”项下条件，对光皮木瓜的香气成分进行GC-MS分析。利用Xcalibur工作站NIST2002标准谱库自动检索各组分质谱数据，并参考有关文献资料，按照面积归一法计算各组分的相对含量。结果从光皮木瓜药材中共检出52个色谱峰，鉴定出35种主要成分，其相对含量总和占总检出物的94.98%。其中，醛类含量最高，占55.45%，酸类占25.35%，烯烃类占6.69%，酮类占4.91%。分析结果见表2，总离子流图见图3。

表2　光皮木瓜香气成分的GC-MS分析结果Tab 2　Analysis results of aroma components of chaenomeles sinensis koehne by GC-MS

图3　光皮木瓜香气成分的GC-MS总离子流图Fig 3　GC-MS total ion chromatogram of aromatic compounds from Chaenomeles sinensis

3　讨论

薄层鉴别中，选取五环三萜类熊果酸作为对照品，熊果酸为光皮木瓜的主要活性成分之一，其性质稳定且提取方法操作简单。薄层色谱在日光和紫外灯下检视，供试品与对照品在相应的位置上，显相同颜色的紫红色斑点和橙黄色荧光斑点。《中华人民共和国药典：一部》(2015年版)收录的木瓜为贴梗海棠的干燥近成熟果实，习称皱皮木瓜。光皮木瓜与皱皮木瓜在市场流通及应用中多混淆不清，本研究选用的木瓜对照药材为皱皮木瓜，通过对比发现，光皮木瓜样品与对照药材色谱在相应的位置上，斑点并没有完全对应，皱皮木瓜斑点较多，在紫外灯下检视较明显，以此可作为鉴别皱皮木瓜与光皮木瓜的依据。

光皮木瓜以干燥近成熟果实入药，其含有较多的有机酸类成分，有机酸类是中药发挥药理作用的活性成分之一，具有明显药理作用，如抗氧化、抗肿瘤、保肝和免疫调节作用等。作为一项评价中药材质量的指标，中药浸出物的含量测定能较全面的反映药材的内在质量。水分、总灰分、酸度和浸出物的含量作为光皮木瓜的检查项，按照《中华人民共和国药典：四部》(2015年版)，水分测定的平均值为10.78%，以均值的120%设限，建议本品水分应≤13.0%；总灰分测定平均值为3.56%，以均值的120%设限，建议本品总灰分应≤5.0%；pH测定的平均值为3.55，以均值的80%～120%范围设限，建议pH应在3.0～4.5之间；依据醇溶性浸出物测定法热浸法测定浸出物的含量，以乙醇为溶剂，测得浸出物均值为29.41%，以均值的80%设限，建议本品浸出物应≥24%。

通过光皮木瓜香气成分的分析，得知其具有果香、青草香气味的正己醛(0.29%)[9]、E-2-庚烯醛(0.28%)[10]，花香气味的苯乙醛(0.41%)、壬醛(0.18%)，草香、花香并伴有橙花气味的α-罗勒烯(0.45%)，玫瑰花香气的苯乙醇，苦杏仁气味的苯甲醛[10]。β-紫罗兰酮(2.13%)具有浓郁的特色芳香，也是木瓜的主要香气成分[11]。有研究采用水蒸气蒸馏法提取光皮木瓜鲜果挥发油，经GC-MS分离与分析，认为内酯及酯类为光皮木瓜挥发油的主要组成部分[12]。而本研究几乎未检测出内酯及酯类成分，表明不同的提取方式及前处理方法对光皮木瓜的香气成分分析的影响较大。周广芳等[13]采用顶空固相微萃取与GC-MS联用方法分析检测光皮木瓜果实中的香气成分，得出C6化合物是构成光皮木瓜果实清香味的主要成分；孟祥敏等[11]采用同步蒸馏-萃取提取挥发油并结合GC-MS对不同木瓜果实的香气成分进行分析，得出醇类、酮类、醛类及酯类物质是构成木瓜芳香风味的重要物质，均与本研究结果相似。