石莲琴，冯 云，吴 杰，晏云涛，杨建发，邹丰才，赵国洪

（1. 云南农业大学动物医学院，云南省高校兽医公共卫生重点实验室，云南昆明 650201；2. 永善县畜牧兽医局，云南永善 657300；3. 玉溪农业职业技术学院，云南玉溪 653106）

贾第虫是一种重要的人兽共患寄生虫，可感染常见家畜及人类，主要通过粪便污染造成流行。贾第虫作为一种机会性致病寄生虫，当宿主免疫功能下降或者丧失时，会出现异常繁殖进而导致疾病发生[1]。据报道，成年动物常呈隐性感染，而幼畜则表现为腹泻、精神沉郁、生长缓慢等，严重时导致死亡[2]。人感染贾第虫后的症状与动物基本相同，主要为腹泄、呕吐、腹痛；典型病症表现为以腹泻为主的吸收不良综合征；儿童患者常因腹泻，引起贫血、营养不良，从而导致生长缓慢[3]。

到目前为止，公认的贾第虫有6个有效种，其中蓝氏贾第虫是唯一一种既能感染人，又能感染其它哺乳动物的虫种[4]。蓝氏贾第虫包括 8 个有效集聚体：A、B为宿主范围广泛的集聚体；C-H为有宿主特异性的集聚体，其中C、D主要感染犬科动物，E 主要发现于偶蹄动物，F、G、H分别发现于猫科动物、啮齿类动物和海豹[5]。

目前，针对云南省猪场的贾第虫感染情况还未见报道。人与猪之间接触较为频繁，这为贾第虫的传播提供了机会，因此了解云南省猪场的贾第虫感染情况，具有重要的公共卫生意义。

1 材料与方法

1.1 样品

从云南省保山市和玉溪市4个养猪场采集了129头猪的新鲜粪样，共129份。

1.2 主要试剂

粪便DNA提取试剂盒：购自OMEGA公司；Taq DNA聚合酶：购自上海生工生物工程有限公司；10×Buffer、MgCl2、dNTP等：购自宝生物工程（大连）有限公司；DL 2000 Marker、核酸染料等：购自昆明丰科生物科技有限公司；琼脂糖：购自全式金生物科技（北京）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 DNA提取 取1 g左右的粪便样品溶于50 mL水中，混匀；用60目的网筛过滤，除去草屑等杂质，3 000 r/min离心3 min，取300 µL于2 mL离心管中。提取步骤按照试剂盒说明书进行。提取的DNA于-20 ℃冻存备用。

1.3.2 PCR 扩增 采用Zhang等[6]报道的贾第虫TPI基因序列引物（表1）。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。PCR反应条件（总体积为 25 µL）为：94 ℃预变性 5 min；94 ℃变性45 s，58 ℃退火 45 s，72 ℃延伸60 s，共35个循环；最后72 ℃再延伸5 min。第2轮反应条件与第1轮相同。预期目的片段大小为530 bp。取扩增好的PCR产物4 µL，用1%琼脂糖凝胶电泳，于紫外凝胶成像系统上观察结果。

表1 TPI基因引物序列

1.3.3 测序分析 将电泳阳性产物送到华大基因公司进行测序；测序结果经NCBI的BLAST核酸比对系统（http∶//www.ncbi.nlm.nih.gov）鉴定，确定是否为贾第虫。

2 结果

2.1 感染情况

129份样品中，检出阳性2份，总检出率为1.55%。其中：保山市44份，检出阳性1份，检出率率为2.27%；玉溪市85份，检出阳性1份，检出率为1.18%。贾第虫TPI序列电泳结果见图1。

图1 贾第虫TPI序列电泳图

2.2 系统进化分析

对阳性序列经比对分析后，使用MEGA 6.0 构建贾第虫种系发育树（图2）。NCB I的BLAST比对分析显示，两个阳性样本均为集聚体B，与人源分离株（KT948104、AB480868）以及猴源分离株（KJ888985）同源性最高，分别为99%和100%。

图2 贾第虫TPI rRNA基因序列的种系发育树

3 讨论

贾第虫宿主范围广泛，可感染包括人在内的多种脊椎动物，还可在人和伴侣动物之间传播[7]。贾第虫呈世界性分布，在欧洲、北美洲、南美洲、大洋洲和亚洲等地区均有感染存在[8]。目前，国内关于猪贾第虫感染情况的报道较少，更未见云南省感染情况的报道。首次报道我国猪贾第虫感染情况的是王海燕[9]对河南省几种猪原虫的调查。她用卢戈氏碘显微镜观察法检出的感染率为0.5%，用PCR扩增检出的感染率为1.2%，检测结果有显著差异。粪样镜检进行的是形态学鉴定，检出率偏低，因此本试验采用巢氏PCR扩增贾第虫TPI序列，对云南省4个猪场进行贾第虫分子检测。此外，李威等[5]采用分子检测，对四川省野猪及小香猪贾第虫感染情况进行调查，发现总体感染率为3.99%，高于王海燕调查的河南省总体感染情况，但大大低于澳大利亚调查的猪感染率（31.1%）[10]。

贾第虫集聚体B有广泛的宿主范围，属于人兽共患集聚体。经序列比对及构建进化树分析，本次检出两个贾第虫阳性样本均属于集聚体B，具有传染人的潜在风险。贾第虫是人兽共患寄生虫，目前被列为危害人类健康的10种主要寄生虫之一。而宿主范围广泛的集聚体B，对人类的危害更严重。本研究调查发现，云南省猪体内存在贾第虫感染。虽然其感染率不高，但有人兽共患风险，且目前并无有效的免疫预防方法[11]，因此需引起重视。贾第虫主要通过“粪-口”途径传播，其中水源污染是造成流行和暴发的主要原因。据报道，全世界132例人贾第虫感染中，104例与饮用水有关[12]。据世界卫生组织（WHO）估计，全世界人群中的贾第虫感染率为2%～30%[7]。我国1997年对30个省份调查的人感染率为2.52%，约有2 850万人感染[13]。云南省已有关于人贾第虫感染的报道。2016年云南省对独龙族小学生进行肠道寄生虫调查发现，贾第虫感染率为2.51%[14]，当地村寨卫生条件差以及喝生水的习惯是主要感染因素。

4 结论

本调查采用巢式PCR，对云南省4个猪场的129份猪粪便样品进行了贾第虫分子检测，检出阳性样品2份，总感染率为1.55%。虽然感染率不高，但这2个阳性样本均为集聚体B，与人源分离株和猴源分离株的同源性很高，分别为99%和100%，存在感染人的风险。因此，需要加强猪场卫生防疫，做好猪粪便的无害化处理，避免因粪便污染而造成疫病流行。

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