王慧芳，金海红，王智文

子宫腺肌病(adenomyosis, AM)是妇科的常见疾病，多发生于育龄期妇女，其基础的病理改变为子宫内膜腺体和间质细胞向肌层浸润并弥漫性生长。近年相关研究发现，AM发病年龄日趋年轻化，虽然该疾病属于良性子宫病变，且激素药物、血管介入、病灶挖除及电凝等措施为临床治疗提供多种选择，但疗效并不显著[1]。尤其对有生育要求的患者，难以接受根治性手术。关于AM的发病机理目前尚未明确，但相关文献表明其发展特性与恶性肿瘤相似，亦可发生种植、浸润、转移和复发等病理现象[2-3]。为探究AM的发病机制，本文研究基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)及其抑制物RECK蛋白在AM病理组织中的表达情况，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择我院2015年6月—2017年11月收治的30例AM患者作为观察对象。①纳入标准：所有患者均行全子宫切除手术，并经病理科确诊。②排除标准：恶性肿瘤及其他子宫疾病患者；3个月内接受激素类药物治疗者。年龄34～58(38.9±7.6)岁；增生期15例，分泌期15例。并收集所有患者的肌层异位内膜(异位组)和非异位内膜(非异位组)。并选取同期25例子宫肌瘤患者的非瘤区内膜作为对照组，年龄35～57(38.2±9.3)岁；增生期12例，分泌期13例。AM患者和对照组的年龄、子宫内膜处于增生期和分泌期比例比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要仪器与试剂：石蜡包埋机(BM型，湖北省医用电子仪器厂)，生物组织摊片、烤片机(C9S-Ⅲ型，湖北省医用电子仪器厂)，切片机(HM450型/EC350-2型，德国MICROM)，离心机(SIGMA 1-13型，美国)，双目显微镜(CKL型，日本OLYMPUS)，数码照相机(NIKON COOLPIX4500型，日本)。鼠抗人MMP-2单克隆抗体(美国NeMarker公司)，兔抗人RECK单克隆抗体(SANTA CRUA公司)，U1traSensitiveTmS-P超敏试剂和DAB显色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)。

1.2.2检测方法：采用免疫组织化学SP法对各组标本病理组织切片的MMP-2和RECK进行测定。经两位病理科医师确诊，显微镜下观察各组染色情况，并记录MMP-2和RECK染色强度。具体步骤为病理组织经10%中性福尔马林固定、常规石蜡包埋制成4 μm的连续切片；60℃恒温箱内烘烤1 h，并逐级脱蜡，水化，PBS液冲洗；RECK采用微波修复抗原，MMP-2采用高温高压修复抗原；后经中和非特异性反应，除去多余血清，滴加工作液，滴加链霉素抗生物素-过氧化酶溶液，室温下孵育30 min(RECK)或10 min(MMP-2)，PBS液冲洗5 min，连续3次，DAB底物显色，苏木素复染切片，梯度乙醇脱水，二甲苯透明2次,各15 min，中性树胶封片，显微镜下观察。

1.2.3结果观察：设定阳性对照和阴性对照。RECK与MMP-2均为细胞质着色，显示为浅黄色至棕黄色的颗粒。随机计数10个高倍视野，阴性为阳性细胞百分率<10%、弱阳性为10%～50%、阳性为50%～75%、强阳性为>75%。参照H-score组织化学评分方法进行评分，并以阳性强度和阳性细胞百分比积分乘积计算RECK和MMP-2蛋白表达积分。

2 结果

2.1MMP-2和RECK阳性表达率情况 异位组MMP-2阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)。非异位组MMP-2阳性表达率与对照组和异位组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。异位组RECK阳性表达率低于非异位组和对照组(P<0.05)，但非异位组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组不同子宫内膜组织MMP-2和RECK阳性表达率情况[例(%)]

注：异位组为肌层异位内膜，非异位组为非异位内膜，对照组为子宫肌瘤患者的非瘤区内膜；MMP-2为基质金属蛋白酶-2；与对照组比较，aP<0.05；与非异位组比较，cP<0.05

2.2MMP-2和RECK蛋白表达积分比较 异位组MMP-2蛋白表达积分高于非异位组和对照组，且非异位组高于对照组(P<0.05)。异位组RECK蛋白表达积分低于非异位组和对照组(P<0.05)，但非异位组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。3组MMP-2和RECK蛋白表达情况，见图1。

表2 3组不同子宫内膜组织MMP-2和RECK蛋白表达积分情况分)

注：异位组为肌层异位内膜，非异位组为非异位内膜，对照组为子宫肌瘤患者的非瘤区内膜；MMP-2为基质金属蛋白酶-2；与对照组比较，aP<0.05；与非异位组比较，cP<0.05

3 讨论

AM主要表现为痛经、经期延长和不孕等，对妇女的身心健康造成极大损伤[4]。虽然AM发病机制并不确切，但多数学者认为其影响因素包括免疫、血管生成、细胞凋亡、细胞转移及侵袭、激素及遗传等，其中细胞转移与侵袭过程与细胞外基质(ECM)成分在周围微环境的降解和重构有关[5-7]。

AM病理特征是子宫内膜腺体和间质向肌层生长，其生长过程复杂，研究显示AM的病理改变与ECM的降解关系密切，主要体现为含ECM成分平滑肌束组成的子宫肌层能够阻止子宫内膜的侵入作用[8]。MMPs在ECM降解过程中起关键性作用，可以降解ECM的所有成分[9-11]。相关文献报道，MMP-2能够降解子宫肌层中的Ⅳ型胶原[12-14]，其过度表达可增强内膜侵袭力，从而降解异位内膜周围的肌层，甚至基底膜的ECM成分，造成AM[15]。本文结果显示，与对照组比较，异位组MMP-2阳性表达率以及蛋白表达积分明显升高，证实上述相关研究，显示MMP-2在AM内膜组织的异常表达与恶性肿瘤具有相似的生物学行为。

图13组不同子宫内膜组织MMP-2和RECK蛋白的表达情况(SP ×400)异位组为肌层异位内膜，非异位组为非异位内膜，对照组为子宫肌瘤患者的非瘤区内膜；MMP-2为基质金属蛋白酶-2

RECK在胚胎发育分化过程中起重要作用，可影响胚胎毛细血管形成、神经肌肉系统的发育、骨与软骨系统发育及神经肌肉连接组织的发育分化等[16-17]。RECK是MMPs抑制剂，能够抑制多种MMPs表达，如MMP-2、MMP-7及MT1-MMP等。多项研究显示,RECK与恶性肿瘤的发生相关，包括肺癌、肝细胞癌、膀胱移行细胞癌、头颈部鳞状细胞癌等，可抑制在恶性肿瘤中高表达的MMPs，从而减弱肿瘤细胞的侵袭和转移能力[18-19]。鉴于RECK可抑制MMP-2的表达，本研究检测不同内膜组织中RECK蛋白的表达，结果显示异位组RECK阳性表达率及蛋白表达积分低于非异位组和对照组，证明AM异位内膜组织中RECK蛋白表达缺失，使得MMPs进一步降解ECM，降低细胞间黏附力，造成子宫内膜异位[20]。

综上所述，MMP-2和RECK蛋白的异常表达可能在AM发病程中发挥重要作用。MMP-2的异常表达与RECK蛋白的表达缺失可能与AM患者子宫内膜细胞“异位”到肌层有关，但引起两者异常表达的具体原因尚需进一步探究。

[参考文献]

[1] Takenaka K, Ishikawa S, Kawano Y,etal. Expression of a novel matrix metalloproteinase regulator, RECK, and its clinical significance in resected non-small cell lung cancer[J].Eur J Cancer, 2004,40(10):1617-1623.

[2] 王晗,董旭,葛常辉.基质金属蛋白酶在生殖中的作用与调控[J].国外医学计划生育分册,2002,21(3):141-144.

[3] Oh J, Takahashi R, Kondo S,etal. The membrane-anchored MMP inhibitor RECK is a key regulator of extracellular matrix integrity and angiogenesis[J].Cell, 2001,107(6):789-800.

[4] 宋元梓.腹腔镜下病灶剔除术联合左炔诺孕酮宫内缓释系统治疗子宫腺肌病[J].现代仪器与医疗,2016,22(5):125-126.

[5] 郭君红,邹丽.调控RECK基因表达对早孕绒毛外滋养细胞MMP-2活化及细胞侵袭力的影响[J].华中科技大学学报,2007,36(4):495-499.

[6] 杨尧华,周新艳,王岚,等.子宫腺肌病诊断及治疗的研究新进展[J].中国妇幼保健,2010,25(27):3992-3995.

[7] 杨钊.胃癌血管生成拟态的初步研究[D].衡阳:南华大学,2011:253.

[8] 王岩岩,黄立,王艳华，等.腹腔镜下病灶切除术联合醋酸亮丙瑞林缓释微球治疗子宫腺肌病临床分析[J].中国综合临床,2016,32(4):375-378.

[9] Yu Z, Pestell T G, Lisanti M P,etal. Cancer stem cells[J].Int J Biochem Cell Biol, 2012,44(12):2144-2151.

[10] 刘倩,吴小翎,罗红春.MMP-2在胃癌组织中的表达及其与微血管生成和淋巴结转移的关系[J].重庆医学,2012,41(13):1262-1264,封2.

[11] 王木森,柳雅玲.子宫腺肌病组织中MMP2、MMP7、RECK、TWIST1、CD133表达及MVD变化[J].山东医药,2016,56(26):53-55.

[12] 唐利,蒋海霞,李燕,等.MT1-MMP、RECK在子宫腺肌病发病中的作用研究[J].中国妇幼保健,2015,30(36):6583-6585.

[13] 李宗涛,张炜旸,芳华,等.子宫腺肌病的最新治疗进展[J].中国妇幼保健,2014,29(27):4524-4526.

[14] 张继红,余繁荣,张蓉.子宫腺肌病中HIF-1α与MMP-2的表达及临床意义[J].中国现代医生,2013,51(6):63-65.

[15] 崔静,李辉,田艳勋.RECK基因甲基化与喉鳞状细胞癌预后的关系[J].医学研究生学报,2014,27(6):615-618.

[16] Huang F, Cao J, Liu Q,etal. MAPK/ERK signal pathway involved expression of COX-2 and VEGF by IL-1β induced in human endometriosis stromal cells in vitro[J].Int J Clin Exp Pathol, 2013,6(10):2129-2136.

[17] Benagiano G, Brosens I, Habiba M. Structural and molecular features of the endomyometrium in endometriosis and adenomyosis[J].Hum Reprod Update, 2014,20(3):386-402.

[18] 陈光朋,付万垒,杨坤富，等.miR-182调控RECK信号通路在非小细胞肺癌进展中的作用[J].解放军医学杂志,2015,40(4):309-314.

[19] 宁士龙,马宵.肿瘤抑制基因RECK的表观调控研究进展[J].肿瘤研究与临床,2016,28(8):565-568.

[20] 贾晨阳,段华,汪沙.血管形成相关因子在子宫腺肌病发病中作用的研究进展[J].中国计划生育和妇产科,2016,8(8):17-21.