刘志平，岳梦琳

(平顶山学院医学院， 河南 平顶山 467000)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升的趋势[1]。侵袭是肿瘤的十大特征之一，也是导致乳腺癌患者不良预后甚至死亡的重要原因之一[2]。金属蛋白酶组织抑制物2(tissue inhibitors of metalloproteinase 2，TIMP-2)通路在肿瘤的侵袭中具有极其重要的作用[3]，TIMP-2是基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2，MMP2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP9)的抑制物，而MMP2和MMP9能够降解几乎所有类型的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)，促进肿瘤的侵袭[4]。大量研究已经证实，通过降低肿瘤细胞内MMP2和MMP9的表达，可以抑制肿瘤细胞侵袭能力[5]。在多种肿瘤包括乳腺癌中，TIMP-2呈低表达[6]，而具体机制尚不明确。微小RNA(microRNA，miRNA，miR)是一类长度约22～24 nt的非编码小分子RNA，在基因调控中发挥重要作用，近年来的研究发现微小RNA-106a(microRNA-106a)与肿瘤细胞的侵袭和转移密切相关[7]。因此，本研究将探讨microRNA-106a是否通过调节TIMP-2通路，促进乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭，旨在为乳腺癌发生侵袭转移的机制研究提供理论基础。

材 料 和 方 法

1 材料

人乳腺癌细胞MDA-MB-231购自中国科学院细胞库；DMEM培养基、胎牛血清、青霉素和链霉素均购自Gibco；脂质体Lipofectamine®3000、TRIzol试剂和RNA提取试剂盒均购自Invitrogen；microRNA序列和qPCR引物序列均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成；逆转录试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；RIPA蛋白裂解液购自上海碧云天生物技术有限公司；BCA蛋白定量试剂盒购自Thermo;兔抗人TIMP-2多克隆抗体和兔抗人GAPDH单克隆抗体均购自Santa Cruz；兔抗人MMP2多克隆抗体和兔抗人MMP9多克隆抗体均购自CST；HRP标记的羊抗兔 II 抗购自上海英基生物科技有限公司；……