杜恩辅，徐 霖，周选民，刘梅讯，张晓龙，崔 宁，侯平志，余惠芬

(湖北医药学院附属十堰市太和医院医学影像中心 442000)

肝细胞癌(HCC)是最常见的肝癌亚型，发病率占全球第5位[1]，HCC确诊后的5年生存率不足12%[2]。分子靶向药物为肝癌治疗提供了新的策略[3-4]，磷脂酰肌醇蛋白聚糖(GPC)3是肝素硫酸多糖家族的一个膜蛋白[5]。自1997年有学者首先发现GPC3的mRNA在HCC组织中高度表达后，多个研究团队对GPC3的生物学特性进行分析发现，GPC3在超过70%的HCC中表达，在正常肝组织中不表达[6-7]。因此，GPC3是一种肿瘤特异性抗原，在肿瘤分子免疫靶向治疗方面有重要应用前景。基于GPC3的高表达，罗氏公司研发出Codrituzumab成为GPC3阳性肝癌的潜在治疗手段[8]。本研究以GPC3为靶点设计了单链抗体，并将单链抗体与荧光染料结合，使其在体内外对GPC3阳性肿瘤都有很好的靶向性，并使其生物相容性增加，半衰期延长，为实验室研究或临床检测提供了新的手段与技术 ，现报道如下。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 DMEM培养基购自Life公司；蛋白Marker购自美国伯乐公司；异硫氰酸荧光素(FITC)偶联羊抗人IgG-Fc单克隆抗体购自南赛博生物公司；胎牛血清(FBS)购自美国Invitrogen公司；罗丹明B荧光染料购自上海碧云天公司； Balb/c裸鼠购自南京大学模式动物所；(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)购自南京晚晴公司；活性近红外荧光基团(NIRB-NHS)试剂盒购自上海科远迪生物科技有限公司；细胞培养瓶及相关培养耗材购自美国热电公司。

1.2方法

1.2.1融合蛋白表达及纯化 通过GeneBank数据库搜索Codrituzumab轻链与重链可变区蛋白序列，使用G4S柔性肽将二者连接在一起，并通过毕赤酵母偏爱密码子优化后送公司合成，导入工程质粒中。……