朱同刚，宫晓燕

（长春中医药大学附属医院，长春 130021）

新扶正除疫颗粒剂的配方为全国名中医、国医大师、白求恩医学奖章获得者任继学教授多年临床经验总结而成，用于预防和治疗流感60余年，是我院应用多年的名方，在SARS、甲型H1N1流行期间，起到了非常重要的预防和治疗作用。柯萨奇病毒是一种常见病毒，可引起多种疾病，其中以病毒性心肌炎最为严重。本研究通过观察新扶正除疫颗粒对柯萨奇病毒B3染毒小鼠心、肺组织中的病毒滴度及组织切片的变化，来观察本药的抗柯萨奇病毒B3的作用。

1 材料与方法

1.1 实验药物及病毒 新扶正除疫颗粒由长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心药物药剂实验室提供。用蒸馏水溶解颗粒，药物浓度为0.06 g/mL。柯萨奇病毒B3毒株由中国中医科学院中药研究所提供。利巴韦林颗粒由四川百利药业有限责任公司生产，购于药店。

1.2 动物及分组 3～4 周龄雄性Balb/c小鼠60只，体质量（10±2）g，由吉林大学农学部实验动物中心提供；随机分为空白对照组、病毒模型组（A组）、新扶正除疫颗粒低、中、高剂量组（B、C、D组）、阳性药物对照组（E组），每组10只。

1.3 实验方法 给除空白对照组以外的每只小鼠腹腔注射50 μL柯萨奇病毒液（10×TCID50），常规饲养，存活72 h以上，且体质量显著降低，证实病毒感染模型成功建立。模型建立成功后，空白对照组和病毒模型组用生理盐水0.1 mL灌胃，每24 h灌胃1次，共计7 d；新扶正除疫颗粒低、中、高剂量各组以新扶正除疫颗粒水溶液灌胃，高、中、低剂量组给药量分别为4.5、9、18 g/（kg·d）；利巴韦林对照组以利巴韦林水溶液0.025 g/（kg·d）灌胃。1次/d，连续灌胃7 d。每天观察小鼠的发病体征及死亡情况，称取体质量并记录，同时计算生存率；各组小鼠于实验结束后处死。1.4 组织中感染性病毒的分离测定 无菌操作取小鼠心、肺脏器各100 mg，用MEM细胞维持液1 mL充分匀浆。匀浆液用微孔滤膜过滤除菌后，反复冻融3次，3 000 r /min，离心30 min，取上清液，- 20 ℃保存备用。取其0.2 mL接种于已生长成单层Hep-2细胞的96孔板中，37，5% CO2孵育2 h后弃去孔内液体，PBS洗涤3次后，加入MEM细胞维持液，37，5%CO2培养72～120 h。同时，每天观察细胞生长情况及相应程度，对出现者进行病毒滴度的测定。

1.5 病理学检查 无菌操作取小鼠心、肺脏器，立即放入10%甲醛溶液中固定。石蜡包埋，连续切片，HE染色后于显微镜下观察各组小鼠脏器组织的病理改变。1.6 统计学方法 组间和组内的差异采用方差分析进行比较，P＜0.05表示具有统计学意义。实验数据用均数±标准差（）表示，数据检验及相关分析用SPSS 13.0统计软件处理。

2 结果

2.1 6组小鼠死亡情况比较 见表1。

表1 6组小鼠死亡情况比较（n = 10）

2.2 A、B、C、D、E组小鼠心、肺病毒滴度 见表2。

表2 A、B、C、D、E组小鼠心、肺病毒滴度（ ，n = 10）

表2 A、B、C、D、E组小鼠心、肺病毒滴度（ ，n = 10）

注：与A组比较，## P＜0.01

脏器 A组 B组 C组 D组 E组心脏 4.767±0.145 30 4.033±0.088 19 3.033±0.088 19 2.100±0.057 74 ## 1.700±0.057 74##肺脏 4.400±0.057 73 3.667±0.088 19 2.933±0.088 19 1.800 ±0.057 74## 1.067 ±0.088 19##

2.3 小鼠脏器组织病理观察 病毒模型对照组小鼠心肌间质血管扩张充血，明显炎细胞浸润，部分心肌细胞轻度水肿；低剂量组炎细胞浸润范围大，少量心肌细胞坏死，其他未见明显异常；中、高剂量组心肌纤维短柱状排列整齐，心肌间仅见少量炎细胞，基本正常心肌结构；利巴韦林给药组：基本正常心肌结构。病毒模型对照组小鼠肺组织切片显示：肺组织结构不清，破坏严重，细支气管壁血管扩张充血，明显炎细胞浸润，管腔内大量炎细胞，肺泡壁血管扩张充血，肺泡腔大量渗出物，炎细胞浸润，提示肺脏为炎症性病变；低剂量组肺组织结构不清，呼吸性细支气管以下肺组织血管扩张充血、炎细胞浸润，有出血，提示肺脏为炎症性病变；中剂量组肺泡间隙轻度增宽，有充血，炎细胞浸润，与模型组比较肺组织结构尚清楚；高剂量组肺泡壁血管扩张，少量炎细胞浸润，基本正常肺结构，其结果与利巴韦林给药组相似。

3 讨论

柯萨奇病毒属小RNA病毒科肠道病毒属，分 A、B 2组，A组（A1～22、 24）， B组（B1～6）[1]。其中，柯萨奇病毒可引起上呼吸道感染、病毒性心肌炎等疾病。引起病毒性心肌炎的感染和非感染原非常多，最常见的感染原是柯萨奇病毒B组[2]。因为其具有高度的亲心肌性，尤以2、3、4型更为常见[3]。病毒性心肌炎在儿童及青壮年中发病率较高，多数临床表现较轻，但也可致急性猝死，最终导致扩张型心肌病和心力衰竭[4]。随着科技进步，对病毒性心肌炎的发病原因和发病机制认识越来越深刻，但在治疗方面进展不明显，与过去一致，仍以抗病毒、营养心肌、免疫调节等综合治疗为主[5]，尚无特效的治疗方法。

新扶正除疫颗粒配方是由任继学教授集60年临床经验提炼出的预防和治疗时疫温病的临床效验方（扶正除疫汤）开发研制而成。该方由红景天、贯众、大青叶、虎杖4味药物组成。全方扶正与达邪并举，清热与滋补兼施，配伍精当，疗效确切。药理学研究[6-14]证实，高山红景天多糖对柯萨奇B3、B5病毒增殖有显著的抑制作用；红景天多糖对CVB3病毒感染乳鼠心肌细胞具有一定的保护作用，且能抑制 CVB3病毒的繁殖；红景天甲醇冷浸提取物对手足口病病毒71型、柯萨奇病毒B型（CVB5）、单纯疱疹病毒Ⅰ型和呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用。大青叶在柯萨奇病毒（CVB3）心肌炎早期可能通过抑制病毒合成、增强白细胞吞噬等作用，达到治疗效果，而有效单体则是通过抑制病毒在Hep-2细胞内的生物合成而达到抗病毒作用，并无直接灭活效果。虎杖提取物对A9及B5型柯萨奇病毒等多种病毒有抑制作用。绵马贯众对柯萨奇病毒 A16、B1、B3、B4 均具有较强的抑制作用，表现在对病毒的抑制和直接灭活病毒。实验研究[15-18]证实，扶正除疫颗粒对柯萨奇、腺病毒等多种病毒所致的细胞病变有一定的减轻作用，扶正除疫颗粒具有抗H1N1流感病毒及抗菌和抗炎作用。

本实验初步证明了新扶正除疫颗粒对柯萨奇病毒B3感染小鼠死亡率、心肺组织的保护作用，为柯萨奇病毒B3的治疗提供了一种新方案，同时也有可能拓宽新扶正除疫颗粒的临床应用范围。

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