凌清标 福建省莆田市秀屿区笏石畜牧兽医站 福建莆田 351146

沙门氏菌（Salmonella）属于革兰氏阴性杆菌，是一种重要的人兽共患致病菌，其主要在人和动物的肠道内寄生。自1885年首次从患畜体内分离到猪霍乱沙门氏菌至今，全世界范围内沙门氏菌血清型已经达到2 500多种，部分血清型可以引起严重的沙门氏菌病，甚至造成死亡[1]。全世界人沙门氏菌感染有逐渐上升的趋势，由沙门氏菌引起的细菌性疾病也在增加，对畜牧业发展、人类健康造成严重危害，因此，控制沙门氏菌的传播对于食品安全和兽医公共卫生有着重要的意义。随着人民生活水平的提高，宠物饲养越来越多，其作为人兽共患病的传染源给宠物饲养者和社会公共健康造成严重的威胁。该研究从一例诊断为细菌性腹泻幼犬病例的粪便中进行细菌分离，得到一株疑似沙门氏菌，并且进行分子生物学鉴定和药敏试验。

1 材料和方法

1.1 样品采集 用棉拭子无菌采集腹泻幼犬的直肠拭子。

1.2 主要试剂 TSA、HE琼脂、BS琼脂、革兰氏染色液均购自青岛海博生物科技有限公司；2×PCR Mixture、DL2000 DNA Marker购自TAKARA公司。

1.3 细菌分离 采集的拭子直接涂抹TSA平板、HE琼脂平板、BS琼脂平板，置37℃培养16~24 h，无菌挑取10~12个单菌落进行革兰氏染色，并对染色形态一致的菌落在新鲜的TSA平板划线纯培养。

1.4 沙门氏菌PCR鉴定 细菌DNA的提取[2]：采用热裂解法提取DNA，挑纯培养物单菌落在EP管重悬于100 μL蒸馏水中，煮沸10 min，12 000 r/min离心5 min，收集上清为DNA模板，置-20℃冰箱保存、备用。

PCR扩增：参照2013年查华等报道的沙门氏菌肠毒素基因stn引物序列[3]，由福州尚亚生物科技有限公司合成，引物序列见表1。……