吴 蔚 南平市动物疫病预防控制中心 福建南平 353000

ELISA法，即酶联免疫吸附法。由于其具有试剂产品稳定、操作相对简单、高灵敏性等优点，是目前我国应用于基层动物疫病抗体检测中的一种常用方法。在日常的免疫抗体效果监测中，人工操作不可避免，而影响ELISA检测结果的因素有很多，温育时间、温度、洗板次数等是其中的重要环节[1]。本文以检测高致病性猪蓝耳病抗体为例，就不同温育时间、温度、洗板次数，对比、分析可能引起ELISA试验数据不成立（即试验失败）的原因及影响。

1 材料与方法

1.1 样本与试剂 样本选取经过高致病性猪蓝耳病疫苗免疫后呈现不同抗体效价的猪血清12份。试剂为猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒（法国LSI）。

1.2 仪器 生化培养箱、微量移液器、酶标仪。

1.3 方法 将经过高致病性猪蓝耳病疫苗免疫后呈现不同抗体效价的猪血清12份进行编号 （1-12号）后分别做5个平行样。以样本1为例，取5个酶标反应板进行编号（板1-5），每份酶标板做12份样品，阴阳性对照做双份。酶标板1按照如下步骤操作：（1）按照试剂盒说明书将所有试剂回温至室温后混匀，配制洗液和样本稀释液。（2）对样本1-12用样本稀释液稀释后加入酶标板1的反应孔，阴阳性对照同时加入；盖膜，37℃温育60 min。（3）去膜洗板3次，拍干。（4）加酶标抗体。（5）盖膜，37℃温育 60 min。（6）去膜洗板 3 次，拍干。（7）加入底物溶液，轻摇后在20~25℃暗处作用10 min。（8）加入终止液，酶标仪（450 nm）读数最终换算成IRPC值。全部在酶标板的过程大致为：加样品－温育－洗板－加酶标抗体－温育－洗板－加底物－暗室作用－加终止液－读数。……