徐 超，王春梅，白 波*

(1.山东大学 齐鲁医学部，山东 济南 250012; 2.济宁医学院 神经生物学研究所，山东 济宁 272067)

在4.5 h内静脉注射重组组织型纤溶酶原激活剂(recombiant human tissue type plasminogen activator，rt-PA)是处理急性缺血性脑卒中最有效方式。由于相对严格的适应症及禁忌症，接受溶栓治疗的患者比例较低[1]。在溶栓后，由于细胞内Ca2+超载、兴奋性氨基酸毒性和线粒体功能障碍等，使再灌注后的脑组织发生继发性损伤，导致患者多数预后不佳[2]。因此，研究能够减轻脑缺血再灌注损伤的新型药物很重要。

在大鼠下丘脑腹外侧核中首先发现食欲素(orexin)，它主要在摄食、能量代谢和睡眠-觉醒等生理功能中发挥作用。其前体经过剪接修饰产生食欲素-A(OXA)与食欲素-B(OXB)。两者作用于脑内广泛分布的受体发挥作用， 食欲素-B可与食欲素1型受体(OX1R)和食欲素2型受体(OX2R)结合[3]。 食欲素-A在发作性睡病、抑郁症和阿尔茨海默病等疾病中起到神经保护作用[4- 6]。但对食欲素-B的研究相对较少。本实验在脑缺血再灌注后的大鼠模型，通过侧脑室注射食欲素-B，探讨食欲素-B在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物：SPF级Wistar大鼠，雄性，鼠龄7～8周，体质量200～230 g[济南朋悦实验动物有限公司，合格证号SCXK(鲁)20140007]。

1.1.2 主要试剂：Orexin-B(Phoenix Pharmaceuticals公司)；Orexin receptor 2抗体、AKT抗体、p-AKT抗体、p-GSK- 3β抗体及二抗羊抗鼠和羊抗兔抗体(Cell Signaling Technology公司)； 2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2, 3, 5-triphenyltetrazoliumchloride，TTC)(Sigma公司)。

1.2 方法

1.2.1 分组及处理：随机将大鼠分为假手术组(control)、缺血再灌注组(I/R)、缺血再灌注+PBS组(I/R+PBS)和缺血再灌注+orexin-B组(I/R+OXB)。制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occulusion，MCAO)模型[7]，进行Zea-Longa 5级神经行为学评分以确定模型是否制备成功，于脑缺血2 h后再灌注24 h。……