吴珏 裘佳寅 许璐 李锦 陈宁 潘亭亭 田亚平

恶性脑胶质瘤是中枢神经系统最常见、死亡率最高的原发性脑肿瘤，占颅脑肿瘤的40%～50%，严重威胁人类健康[1]。侵袭和迁移行为是胶质瘤细胞的重要特征，脑胶质瘤向正常脑组织周围弥漫性、浸润性生长，手术难以完全切除。因此，探索脑胶质瘤侵袭和迁移的分子机制，寻找其潜在的治疗分子靶点将有重要临床意义。PARK2基因编码的蛋白是一种E3泛素连接酶，参与生物体内蛋白的泛素化修饰，并连接蛋白酶体降解系统，最初是作为常染色体隐性遗传性少年型帕金森病的致病基因而被发现[2-5]。但它在胶质瘤细胞中侵袭迁移的生物学功能和可能的分子机制尚不明确。本研究通过在脑胶质瘤细胞中构建过表达PARK2细胞株，揭示PARK2影响脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移作用。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂

U138，A172，U251，U373，T98G细胞株均购于ATCC细胞库；DMEM高糖培养基、胎牛血清、DMSO、胰酶等均购于Gibco；PARK2抗体购于CST公司； GAPDH抗体、二抗购于Santa Cruz公司；载体pBABE-puro购于Cell Biolabs Inc公司产品；Matrigel购于Corning公司；Transwell小室购于BD公司。

1.2 稳定过表达细胞株的构建

选用逆转录病毒载体pBABE-puro vector来构建PARK2-WT的稳定过表达细胞系。选择状态良好的细胞，将包装好的逆转录病毒载体pBABE-puro-PARK2病毒液转染到脑胶质瘤细胞中，感染24～48 h后嘌呤霉素筛选阳性克隆3 d，收集以上细胞株的蛋白，进行免疫印迹检测PARK2在这些细胞中的蛋白的表达水平。

1.3 免疫印迹

RIPA蛋白裂解液裂解细胞后，8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，转移至硝酸纤维膜上；用含5%脱脂奶粉的TBST 封闭1 h；……