邹治情， 王俊玲， 陈思， 谢雨， Dinsh Kumar K,吴亮，*， 姜旭淦， 阴晴， 陈盛霞， 许化溪

(1. 江苏大学医学院， 江苏 镇江 212013； 2. 江苏大学附属医院检验科， 江苏 镇江 212001)

金黄色葡萄球菌是临床常见的革兰阳性菌，可产生多种毒力因子，引起感染者食物中毒、假膜性肠炎、烫伤样皮肤综合征、毒素休克综合征、化脓性炎症和败血症等，给患者造成极大损害[1]。近年来随着抗生素的广泛应用，金黄色葡萄球菌耐药现象日益严重，临床耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus, MRSA)分离率逐年提升。目前金黄色葡萄球菌的分离鉴定和耐药性分析需要5～7 d，方法烦琐且耗时耗力，不能满足临床诊断需求。PCR法等分子生物学技术是目前公认最具发展前景的细菌鉴定和耐药性分析技术，具有高灵敏度、高特异性及操作简便迅速等优点[2]。但PCR法检测结果的灵敏度和可信度依赖模板DNA质量，因此获得高质量的金黄色葡萄球菌基因组DNA对于开展PCR检测工作十分重要[3]。

金黄色葡萄球菌具有厚重的细胞壁，煮沸、冻融和溶菌酶裂解等常规方法难以有效破坏其细胞壁[4]。此外大部分临床菌株还能分泌耐热核酸酶，经煮沸后耐热核酸酶仍具有降解细菌核酸的能力[5]。因此金黄色葡萄球菌基因组DNA提取难度较大，使用常规方法提取细菌基因组DNA产率极低，无法用于PCR扩增。本研究中我们参考植物细胞基因组DNA碱裂解提取法并加以改进，建立了一种简单、经济、有效的提取方法，现报告如下。

1 材料和方法

1.1 菌种

10株金黄色葡萄球菌株由江苏大学附属医院检验科微生物室鉴定分离，均经VITEKⅡCompact全自动细菌鉴定仪(法国生物梅里埃公司)鉴定为MRSA菌。……