小窝蛋白-1敲减对人甲状腺上皮细胞趋化因子mRNA表达的影响

2018-06-08路庆艳刘宝翠毛朝明董昕牟笑许铖铖郑婷婷

江苏大学学报(医学版) 2018年3期

关键词：研究

路庆艳，刘宝翠，毛朝明，董昕，牟笑，许铖铖，郑婷婷

(江苏大学附属医院核医学科，江苏镇江 212001)

桥本甲状腺炎(Hashimoto′s thyroiditis， HT)是造成甲状腺功能减退症最常见的原因，其主要病理机制是大量淋巴细胞浸润甲状腺间质并免疫损伤甲状腺细胞[1]。小窝蛋白-1(Caveolin-1)是细胞膜上囊状样结构小窝的主要蛋白，在正常甲状腺上皮细胞中，主要位于细胞膜的顶端，维持甲状腺激素的正常合成。先前的研究发现，桥本甲状腺炎患者甲状腺组织中Caveolin-1的表达降低，尤其在淋巴浸润严重的区域更为显著[2-3]。近年来研究显示，趋化因子在诱导桥本甲状腺炎患者淋巴细胞浸润的过程中发挥重要的介导作用[4-6]。本研究旨在构建Caveolin-1基因RNA干扰慢病毒，探讨其对人甲状腺上皮细胞Nthy-ori 3趋化因子mRNA表达水平的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

人甲状腺上皮细胞系Nthy-ori 3-1购自ECACC细胞中心, 人胚肾上皮细胞293T、shRNA慢病毒载体pLKO.1、包膜质粒pMD2.G、包装质粒psPAX2均由上海中科院提供。兔抗人β-肌动蛋白抗体、兔抗人Caveolin-1抗体(CST公司)；细胞培养基、胎牛血清(Gibco公司)；脱脂奶粉(恒天然有限公司)；RNA抽取试剂Trizol、逆转录试剂(日本TaKaRa公司); 2×含染料Taq预混PCR反应试剂 (北京康润诚业生物公司)；氨苄青霉素、嘌呤霉素，感受态大肠埃希菌DH5α、质粒小抽试剂盒(北京天根生化科技有限公司)；ECL发光液、全蛋白提取试剂盒、PVDF膜(美国Millipore公司)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天公司)。