王晶哲， 王小铃， 王娟， 杨鑫鑫， 闫美娜， 李欣悦， 王荟， 刘霞， 邵启祥

(江苏大学医学院， 江苏 镇江 212013)

T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif，ITIM)结构域蛋白(T cell Ig and ITIM domin，TIGIT)是近年来新发现的具有免疫抑制作用的共刺激分子，是NK和T细胞共有的抑制性受体[1]；其是由244个氨基酸残基组成的Ⅰ型跨膜蛋白，含有一个IgV样结构域的胞外段、一个跨膜区及一个含ITIM的胞内段[2]。TIGIT能够与CD226竞争结合脊髓灰质炎病毒受体(poliovirus receptor，PVR，即CD155)从而抑制T细胞的活化，TIGIT与PVR结合的亲和力远高于CD226。PVR主要表达于肿瘤细胞和抗原提呈细胞表面[3-4]。TIGIT与树突状细胞表面的PVR结合后促进IL-10表达，抑制IL-12(p40)表达[5]。研究表明，TIGIT与自身免疫性脑脊髓炎(EAE)等多种自身免疫性疾病有关[6]。研究发现PD-1/PDL-1/2抗体治疗会出现耐药，而耐药的主要原因是肿瘤微环境表达大量的TIGIT等负向调节分子[7-8]，因此深入阐明TIGIT等分子的生物学功能，研发其阻断型抗体进行临床肿瘤治疗就显得尤为迫切。

mLumin是华中科技大学武汉国家光电实验室(筹)骆清铭和张智红教授通过基因重组构建的一种新型的红色荧光蛋白，发射波长为621 nm[9]。mLumin的组织穿透能力强，并且光谱串扰比较小[10]，所以是一种良好的荧光蛋白。抗原表位对抗体的制备具有重要意义，本研究拟建立一个能够用于蛋白质在细胞膜表面表达的通用载体，为此我们选择TIGIT作为靶分子，构建其胞外序列、跨膜区和mLumin表达载体，为后期筛选阳性表达细胞、流式细胞术分选目标细胞奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级C57BL/6小鼠，6～8周，雄性，本校实验动物中心提供，合格证号：No.201708296。……