王飞， 冯奇， 秦杰， 李婉， 卢春

(南京医科大学病原生物学系， 江苏 南京 211166)

高迁移率族蛋白(high mobility group，HMG)于1973年被发现，因其特殊的溶解性和在SDS-PAGE中的高迁移率而得名。HMG蛋白是含量仅次于组蛋白的染色质蛋白，分布在细胞核内，主要行使调节染色质结构的功能；此外，它还参与转录、染色质重组和DNA修复等细胞生物学过程[1-2]。HMG蛋白根据其同源性可进一步分为HMGA、HMGB、HMGN 3个家族[3]，其中HMGB家族的HMGB1和HMGB2具有很高的同源性。研究显示，HMGB1蛋白参与调节免疫系统功能及炎症反应，促进多种肿瘤形成与血管生成[4-5]。近来研究发现HMGB2在乳腺癌、恶性胶质瘤和肝癌[6]等多种肿瘤中呈高表达，且在肿瘤的发生和发展过程中起重要作用[7-9]。启动子是具有调节功能的DNA序列，位于基因5′端上游，具有可以与反式作用因子结合的顺式作用元件结构。启动子就像“开关”，能够活化RNA聚合酶并使之与模板DNA准确结合，起始转录，其本身并不影响基因的表达，而是通过与转录因子结合而控制基因转录起始[10-14]。

本研究拟构建含有HMGB2启动子序列的荧光素酶报告基因重组质粒，并对其进行功能活性鉴定。同时，通过软件分析预测可能与HMGB2启动子序列结合的转录因子，为进一步研究调控HMGB2基因转录活性的转录因子提供依据。

1 材料与方法

1.1 质粒和细胞

pGL3-Basic、pCMV6-Entry-C-Flag、pCMV6-Entry-C-Flag-p53和海肾荧光素酶报告质粒pRL-TK为本实验室保存。本实验所使用的细胞包括人胚肾上皮细胞(293T细胞)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)，分别培养在含有10%和20%血清(美国Gibco公司)的DMEM(美国Gibco公司)中；培养基中含10 μg/mL链霉素和100 U/mL青霉素，所有细胞均培养在37 ℃、5%CO2条件下的恒温培养箱中。……