丁方方， 申红星， 王华， 邵世和

(1. 江苏大学医学院， 江苏 镇江 212013； 2. 安徽医科大学第一附属医院生殖中心， 安徽 合肥 230032)

胃癌死亡率居世界癌症第3位[1-2]。由于缺乏特定的早期症状，大多数胃癌患者确诊时常已属晚期，5年生存率低于20%[3]。尽管胃癌在手术、化疗、放疗和靶向治疗等方面取得了显著进展，但是患者预后仍未得到显著改善[4]。普列克底物蛋白同源样结构域家族A成员1蛋白(pleckstrin homology-like domain family A member 1, PHLDA1)是潜在的转录因子，为Fas(CD95)表达、活化和诱导小鼠T细胞杂交瘤细胞的凋亡所需，编码一类进化高度保守的pleckstrin同源性相关蛋白家族[5-7]。PHLDA1在多种肿瘤中呈异常表达[7]：例如，在黑色素瘤[8]、乳腺癌[9]、口腔癌[10]及胃腺癌[11]中呈低表达，而在结肠癌和肠腺癌中呈高表达，并且结肠癌细胞中，PHLDA1敲低可抑制非贴壁依赖性细胞的生长且减少其迁移[12-13]。研究表明，PHLDA1参与调节细胞的凋亡和增殖[14]。关于PHLDA1在胃癌中的作用及调控机制尚不清楚，本研究通过PHLDA1基因干扰技术观察PHLDA1敲减对胃癌细胞增殖的影响，旨在探讨PHLDA1在胃癌发病机制中的潜在作用。

1 材料和方法

1.1 材料

Trizol购自北京全式金生物技术有限公司；qRT-PCR试剂盒和反转录试剂购自南京诺唯赞生物科技有限公司；细胞蛋白裂解液RIPA、蛋白酶抑制剂PMSF、BCA蛋白浓度测定试剂盒以及CCK8试剂均购自碧云天生物科技有限公司；靶向敲减PHLDA1基因的siRNA和对照乱序RNA序列均由苏州吉玛基因股份有限公司合成；PVDF膜(0.45 μm)购买自密理博(中国)有限公司；HRP标记山羊抗兔IgG二抗(Santa Cruz公司)；GAPDH一抗(CST公司)；PHLDA1抗体(Abcam公司)；其他抗体均购自沈阳万类生物科技有限公司；……