罗旋， 牟笑， 郑婷婷， 董昕， 刘宝翠， 毛朝明

(江苏大学附属医院核医学科， 江苏 镇江 212001)

桥本甲状腺炎是一种常见的器官特异性自身免疫性疾病，主要特点是甲状腺特异性T淋巴细胞和其他免疫细胞大量浸润甲状腺组织，以及甲状腺上皮细胞(thyroid follicular cells, TFCs)的破坏，最终导致甲状腺功能减退[1]。近年来研究表明，该病的发生与遗传、吸烟、过量碘的摄入及感染等有密切的关系[2-6]。

脂多糖是革兰阴性细菌细胞壁的主要致病成分，可以诱发多种炎性反应。已有实验证明脂多糖可以破坏T、B淋巴细胞对鼠甲状腺免疫蛋白的耐受进而促进桥本甲状腺炎的发生[7-8]，但是确切的机制尚不清楚。本研究分析脂多糖对TFCs的增殖、凋亡、吞噬及胞内活性氧产生的影响，探讨脂多糖在桥本甲状腺炎发病中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

TFCs系Nthy-ori 3-1细胞购于ECACC细胞中心。胎牛血清、RPMI-1640培养基(Gibco公司)。脂多糖(Sigma公司),荧光微球(nile red fluorescent FluoSpheres® beads)为BD公司产品，MTT(上海碧云天生物公司)，AnnexinV Alexa Fluor 647/PI凋亡检测试剂盒(南京福麦斯生物公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 Nthy-ori 3-1细胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基(含100 μg·L-1链霉素、100 IU·L-1青霉素)，置于37 ℃、5% CO2的培养箱培养。

1.2.2 MTT法检测Nthy-ori 3-1细胞增殖活性 将处于对数生长期的Nthy-ori 3-1细胞以每孔3.5×103个接种于96孔板中，每组设5个复孔，每孔加入200 μL含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基(含100 μg·L-1链霉素、100 IU·mL-1青霉素)，置于5% CO2培养箱培养。第2天，浓度梯度组分别加入0、10、20、100、150 ng·mL-1的脂多糖处理Nthy-ori 3-1细胞48 h；时间梯度组加入100 ng·mL-1的脂多糖分别处理Nthy-ori 3-1细胞24 h和48 h。处理结束后，弃去上清液，每孔加入终浓度为0.5 mg·L-1的MTT培养基100 μL，置于5% CO2培养箱孵育4 h。弃去上清液，每孔加入100 μL DMSO振荡5～10 min，使结晶充分溶解。……