（1四川省妇幼保健院检验科 四川 成都 610045）

（2西南医科大学附属医院检验科 四川 泸州 646000）

（3四川省妇幼保健院功能影像科 四川 成都 610045）

成春岚1 向成玉（通讯作者）2 朱巧英1 陈曦3 石艳艳1 倪雪梅1 李宁1

真菌(1-3)-β-D葡聚糖的检测是诊断深部真菌感染的快速准确的方法，其特异性和敏感性已经得到一致的公认[1.2.3.4.5]。但是据报道生物大分子和头孢菌素等对检测结果有影响[3.4.5]，常常出现假阳性、假阴性结果。为了观察体外检测过程中是否受到常见介质的影响。我们选择了正常血浆、无热原蒸馏水、0.9%的生理盐水、0.02%两性霉素B生理盐水和0.75%氟康唑生理盐水对白色念珠菌进行稀释，以观察治疗用药两性霉素B和氟康唑对体外检测结果的影响。现将结果报告如下。

1.材料与方法

1.1 仪器与试剂

MD-80型微生物动态快速检测系统，T01智能恒温仪，冰浴槽以及GKT109动态真菌检测试剂盒(定量),均由北京金山川科技发展公司提供。

1.2 待测液制备

将白色假丝酵母菌用正常血浆、无热原蒸馏水、0.9%的生理盐水、0.02%两性霉素B生理盐水和0.75%氟康唑生理盐水稀释为0.05麦氏单位（含白色念珠菌1×107CFU/ml）。取上述制备好的各样本100ul，加入样品处理液中混匀后70℃保温10分钟取出后立刻放入冰水浴中即为待测样品。细菌培养取每种液体10ul倾注于平板接种，根据生长的菌落进行计算。

1.3 测定分析

取待测样品200ul直接加入反应主剂中，溶解后使用微量加样器转移至10×75mm标准玻璃反应管中（操作规程中不要产生气泡），插入MD-80微生物快速动态测定系统中进行反应，反应结束后由标准曲线自动计算出待测血浆中葡聚糖含量。操作过程中注意避免微生物及细菌污染。

1.4 统计分析

测定结果用SPSS统计软件t检验进行分析,(1-3)-β-D葡聚糖含量以均数±标准差表示，P＜0.05为差异有显著性意义。

2.结果

实验组白色假丝酵母菌菌落数大于10万CFU/L，葡聚糖含量为93.8±15.8ug/L，对照组白色假丝酵母菌菌落数为2000CFU/L，葡聚糖含量为7.1±2.5ug/L,经spss统计软件t检验，组内结果无显著性差异（P＞0.05），组间结果有显著性差异（P＜0.05）。结果见附表。

表1 两组(1-3)-β-D葡聚糖浓度（ug/L）

表2 两组白色假丝酵母菌菌落数（CFU/L）

3.讨论

（1-3）-β-D葡聚糖是一种多糖，普遍存在于除接合菌外的真菌细胞壁中，占真菌细胞壁干重的50%以上，尤其在酵母样真菌中含量最高[1]，其他微生物如细菌、病毒及动物、人体细胞均缺乏此成分。因此，血浆（1-3）-β-D葡聚糖检测对真菌深部感染早期诊断具有重要意义[1.2.3.4.5]。

某些情况可干扰检测结果而出现假阳性，如标本污染等。本研究中所需器皿均行灭菌、去热源处理，操作中坚持无菌原则，所选病例均排除了干扰因素，检测结果可靠。

为了观察体外其他因素对结果的影响，我们对检测介质进行研究，所选几种介质除抗真菌药外，基本为实验时常用的介质，结果发现：实验组、对照组内葡聚糖体外检测无显著差异，表明检测结果与液体介质无关；特别是在真菌治疗过程中使用两性霉素和氟康唑很普遍，但本研究未发现治疗用两性霉素和氟康唑对结果有异常的影响。组间结果差异有显著性，表明与菌落数显著相关，说明一定浓度的真菌溶液葡聚糖含量才足够检出。当溶液中含有的真菌小于10000个菌落数时，体外检测其葡聚糖含量不能测出，说明这一计量真菌溶液葡聚糖含量还达不到体外检测检出水平。至于是否能引起感染，尚需动物实验进一步证明。这需要下一步实验来研究。

[1] Von EiffM,RoosN,Schul R,et al.Pulmonary, aspergillosis:early dignosis improves surviva1[J]. Respiration,1995,62(6):341-347.

[2]李岷，吴绍熙.一种深部真菌早期诊断的新方法-测定真菌细胞壁成分葡聚糖.国外医学皮肤性病学分册，1998，24（6）：344-346.

[3]闻平.血清内毒素和1-3-β-D葡聚糖检测方法的探讨[J].上海医学检验杂志，2001，16(2):96-97.

[4] Mennink KerstenMA,Donnelly JP,Verweij PE. Detection of circulating galactomannan for the diagnosis and management of invasive aspergillosis[J].Lancet Infect Dis,2004,4(6):349-357.

[5]张建芳，徐修礼，樊新,等.深部真菌感染患者血浆葡聚糖检测的临床意义[J].中华医院感染学杂志，2005.15（3）：354-355.