庞佳伦 马 娜 彭 莹 王 华 贾政军

湖南省妇幼保健院(长沙，410000)

孕早期胚胎停育及自然流产的发生率超过1%[1]，严重影响患者的身心健康。辅助生殖技术(ART)虽然大大提高了妊娠率，但60%以上受术者发生自然流产和胚胎停育，查明原因对提高妊娠率及预防自然流产意义重要。尽管造成胚胎停育及自然流产的因素很多且存在诸多争议，但染色体异常是多数学者认可的最主要原因[2]。染色体异常检测常采用绒毛细胞培养染色体G显带核型分析技术，但分辨率和敏感度较低，漏检率和误检率较高。近年开展的染色体微阵列技术(CMA)在一定程度上克服了上述缺陷，对筛查有显著的指导意义[3]。本文对此技术的临床应用进行总结。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性收集2017年8月-2018年3月本院确诊为胚胎停育、自然流产并行清宫术的临床资料(病例组)，纳入标准为年龄21～42岁、无严重宫内疾病。排除标准[4-5]为患有子宫内膜异位症、子宫肌瘤等影响胚胎着床、发育的因素，男方精子不成熟。选择同期正常妊娠女性(对照组)。本研究经过医院伦理委员会批准，所有受试者均签署知情同意书。

1.2 染色体检测

1.2.1采集标本及提取DNA[6]将新鲜绒毛组织标本浸泡在装有无菌磷酸缓冲盐液离心管内，采用基因组DNA提取试剂盒提取DNA并检测浓度及纯度，待测DNA含量应 25g，-20℃存储备用。

1.2.2单核苷酸多态性芯片杂交[7-9]使用CMA分析系统(Affymetrix GCS3000Dx v.2)检测，Affymetrix Cytoscan 750K 芯片备检，操作严格按照说明书执行。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组对象基本情况

病例组86例，年龄(31.2±0.3)岁(21～42岁)，体质量指数(22.6±1.5)kg/m2；第一胎79例，二胎7例；临床症状表现为下腹疼痛31例(36.0%)，阴道出血32例(37.2%)、精神不佳23例(26.7%)；早期流产46例(53.5%)，晚期流产29例(33.7%)、胚胎停育11例(12.8%)；自然妊娠43例(50.0%)，宫腔内人工受精28例(32.6%)、ART治疗15例(17.4%)。对照组33例，年龄(31.5±0.2)岁(20～43岁)，体质量指数(22.9±1.9)kg/m2；第一胎28例，二胎4例；自然妊娠16例(48.6%)，宫腔内人工受精11例(33.3%)、ART治疗16例(18.2%)。两组一般情况比较无统计学差异(P>0.05)。

2.2 不同妊娠结局者绒毛组织CMA异常情况比较

两组均有不同程度异常染色体和非整倍体。病例组86例中，异常染色体65例(75.6%)、非整倍体56例(65.1%)；早期流产、晚期流产和胚胎停育的异常染色体和非整倍体发生率均高于对照组，且早期流产组高于胚胎停育组(P<0.05)，见表1。

2.3 妊娠方式与绒毛组织CMA异常关系

不同妊娠方式，绒毛组织CMA异常染色体和非整倍体发生率病例组均高于对照组(P<0.05)，但病例组中未见差异(P>0.05)，见表2。

表1 两组不同妊娠结局者CMA异常类型比较[例(%)]

*与对照组比较#与早期流产组比较P<0.05

表2 两组不同妊娠方式绒毛组织CMA异常比较[例(%)]

*与对照组同类妊娠方式比较P<0.05

2.4 病例组染色体异常类型

病例组中染色体异常65例中，异常类型分别为常染色体三体23例(35.4%)，常染色体单体15例(23.1%)，常染色体双三体14例(21.5%)及X单体13例(20.0%)。

3 讨论

胚胎停育及自然流产导致因素很多，如子宫异常、生殖道感染及不良环境等，其中色体异常是最为常见也是最重要的病因[10-11]。本次结果显示，与正常妊娠对照组比较，胚胎停育及自然流产的病例组绒毛组织异常染色体及非整倍体等发生率明显增高，提示检测早孕绒毛组织染色体对评估胚胎停育及自然流产有一定临床价值。同时在早期流产患者中，异常染色体或非整倍体均明显增高，分析原因可是染色体异常的胚胎着床功能降低，提早出现了发育停滞；而妊娠方式与绒毛组织染色体异常类型未见差异。但有文献认为[12-13]，与自然妊娠相比，ART出现染色体异常的概率降低，与植入前胚胎经过体外人工优选相关。本文未见这种差异，除了纳入的案例相对较外小，可能与CMA技术缺陷有关，比如CMA难以检测染色体某些突变，无法检测低水平的嵌合体、碱基的插入或缺失，DNA甲基化异常和其他碱基修饰异常等[14]。

本文病例组出现异常染色体类型包括常染色体三体、常染色体单体、常染色体双三体及X单体，其中染色体三体发生率最高，与文献报道相似[12-15]。染色体三体是导致早期胚胎停育的主要因素，产前诊断可最大限度防止染色体异常患儿的出生[15]。有研究认为染色体数目异常还与妊娠女性年龄相关[16-17]，由于本文纳入者年龄跨度不大，提示今后有必要纳入更多高龄女性案例分析研究。

目前，我国许多医疗机构已经开展了CMA用于产前诊断，但实践时间不长，实际诊断和操作经验不足，也给该技术的应用带来了诸多挑战。但在发现染色体异常相关的出生缺陷方面的优势仍无可比拟[19-19]。而应用该技术检测绒毛组织，对预测妊娠期胚胎停育和自然流产，具有重要临床指导意义。