孙玉章，许运斌，王宏华，孙明军，蒋贻海

（1. 青岛蔚蓝生物股份有限公司，国家动物用保健品工程技术研究中心，山东青岛 266000；2. 遵义医学院，贵州省传染病与生物安全特色重点实验室，贵州遵义 563000；3. 中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032）

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea，PED）是由冠状病毒科冠状病毒属猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的一种急性、高度接触性猪传染病，以水样腹泻、呕吐和脱水为主要临床特征[1]。本病1971年首次报道于英国，随后迅速在欧洲蔓延，目前全球范围内均有报道。我国1984年首次确认了该病的存在和流行[2]。PEDV可感染各种年龄的猪。哺乳仔猪、架子猪或育肥猪发病率可达100%，尤其是哺乳仔猪，受害最严重，而母猪发病率为15%～90%[3]。由于PEDV主要感染仔猪肠道组织黏膜并在小肠和结肠的绒毛上皮细胞浆中复制，因此局部黏膜免疫产生的抗原特异性分泌型免疫球蛋白A（secretory IgA，SIgA），理论上应具有更好的免疫潜力和免疫效果[4]。

研究证实，乳酸菌是诱导黏膜免疫极好的免疫佐剂和疫苗载体[5]。因此，本研究构建了表达PEDV表面纤突糖蛋白主要核心保护性抗原表位（COE）的重组乳酸菌基因工程菌株，以期为下一步体内重组乳酸杆菌抗PEDV黏膜免疫效果评价和口服疫苗制备提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 病毒、载体与菌株

PEDV SG-1株：2016年分离自山东省寿光市某规模化养猪场，由本实验室鉴定并保存；乳酸菌基因工程菌株和穿梭表达载体pSIP等：吉林大学动物医学院兽医传染病教研室惠赠；pMD-18T载体：购自Takara（大连）有限公司；……