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贵州黑山羊魏氏梭菌和链球菌双重感染的诊治

2018-05-25陈学忠

中国草食动物科学 2018年2期
关键词:魏氏梭革兰氏梭菌

陈学忠

(贵州省关岭布依族苗族自治县草地畜牧业发展中心,关岭 561300)

羊梭菌性疾病(Clostridiosis of sheep)包括羊快疫、羊肠毒血症、羊猝狙、羔羊痢疾和羊黑疫等,是因梭状芽胞杆菌属(Clostridium)中的细菌感染引起的一类急性传染病[1]。由魏氏梭菌引起的羊病称之为魏氏梭菌病,魏氏梭菌(Cl.welchii),又称产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens),菌体呈直杆状,两端钝圆,革兰氏阳性菌,属于腐生性厌氧芽孢致病菌,是引起畜禽猝死症、肠毒血症、坏死性肠炎、气性坏疽的主要致病菌[2]。感染魏氏梭菌后家畜死亡率高达70%~100%,且不同菌型的魏氏梭菌常混合感染,药物治疗效果不明显[3-4]。链球菌(Streptococcus)为一种呈链状或成对存在的革兰氏阳性球菌,多个种的链球菌具有强致病性,常是人兽共患病的病原[5]。在猪、牛、羊等动物中,链球菌不仅可以引起败血症及乳房炎,也是引起肺炎的重要病原性细菌之一,给养殖业造成严重的经济损失的同时,亦引起严重的公共卫生问题。近年来,山羊养殖业不断向规模化方向发展,但各种山羊的传染病,特别是呼吸道疾病的发病率不断上升,给山羊养殖业的健康发展造成了严重影响[6]。

2017年9月中旬,贵州某黑山羊养殖户送临床症状相似的发病羊3只到关岭布依族苗族自治县畜牧服务中心实验室诊断。发病黑山羊表现为呼吸急促、口吐白沫、体温升高、大便带血等。通过临床症状、病理解剖、细菌学检测和支原体PCR技术诊断,确诊为魏氏梭菌和链球菌混合感染。

1 临床症状

发病羊表现为精神萎靡、呼吸急促、消瘦、磨牙,体温升高,脉搏每分钟80~110次,呼吸每分钟25~35次,并出现独处、卧地不愿走动,强行驱赶时行动迟缓,腹部臌胀,有的排粪困难,有的里急后重,大便溏稀,并夹有黏液和脱落的黏膜,间有血丝,随即口吐大量白色泡沫,很快倒地死亡,发病母羊6只全部急性死亡。

2 剖检变化

剖检发现病死羊心尖及心耳有瘀斑;肺脏部分出血、水肿(图1);真胃胃底黏膜有大面积充血、出血(图2);肝脏表面有不同程度的斑块,边缘出现梗塞性坏死(图3);脾脏肿大,有白色坏死灶(图4);肾脏被膜出血,有坏死灶;病死羊肛周粘有带血丝粪便,各肠段黏膜均有不同程度的充血、出血现象,黏膜组织水肿;肠系膜及肝脏上有数个细颈囊尾蚴(水铃铛)。

图1 肺脏病变及坏死

图2 真胃黏膜充血、出血

图3 肝脏边缘坏死、肿胀

图4 脾脏肿大、有坏死灶

3 实验室诊断

3.1 细菌分离培养

无菌采集送检羊的心、肝、脾、肺、肾、血液进行细菌分离培养,即接种普通营养琼脂平板,于37℃、5%CO2需氧/厌氧培养24~48 h。发现在普通琼脂平板上有A菌表面光滑、半透明、圆形中央隆起的菌落,且只在厌氧培养中生长,B菌的菌落较小,在需氧和厌氧环境中均能生长。然后再将其单个菌落接种于血液琼脂平板上可见A菌呈现圆形、边缘整齐、中央隆起、灰白色、半透明的大菌落,菌落周围有棕色溶血环,有的有双溶血环;B菌在血琼脂平板上生长好,能长出灰白色、圆形、透明、闪光、中央隆起、表面光滑露珠状小菌落,菌落周围呈β溶血。挑取典型单个菌落涂片、革兰氏染色、镜检可见到两端钝圆的蓝紫色革兰氏阳性、短粗的杆菌(图5)和革兰氏阳性链状球菌(图6)。

图5 10×100倍油镜下革兰氏阳性杆菌

图6 10×100倍油镜下革兰氏阳性球菌

3.2 细菌的生化特性鉴定

将分离纯化的细菌在无菌条件下分别进行葡萄糖、甘露醇、甘露糖、N乙酰葡胺、木糖醇、蕈糖、精氨酸水解、果糖、木糖、硝酸盐、蔗糖、蔗糖、尿素、山梨醇、乳糖、麦芽糖等发酵实验,硫化氢实验,靛基质实验,明胶液化实验和含铁牛乳实验。其中有A菌可以发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖产酸产气,硫化氢实验呈阳性,靛基质实验呈阴性,明胶液化实验为阳性,但不发酵木糖、甘露醇、山梨醇,在含铁牛乳实验中,分解乳糖产酸,出现“汹涌发酵”现象。符合梭菌的生化指标。B菌可以发酵果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖产酸产气,葡萄糖实验呈阳性,木糖醇实验呈阴性,硝酸盐实验为阴性。符合链球菌的生化指标。

3.3 支原体的PCR检测

无菌解剖采集2只死亡病羊的肺脏,适量取样研磨后反复冻融3次,匀浆器磨20min后收集匀浆,12 000 r/min离心10min,取上清,并与采集的病死羊血液一起分别提取DNA(按支原体PCR检测核酸提取试剂盒使用说明书)。用支原体PCR检测试剂盒(购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司)进行PCR核酸检测。反应体系(总体积 20μL):16μL PCR 反应液,2μL Taq DNA 聚合酶,2μL 模板 DNA。PCR 扩增程序:94℃ 3min;94℃30 s,50℃ 30 s,72℃ 45 s,35 个循环;72℃ 延伸 10min。反应结束后取5μLPCR产物于1%的1×TAE琼脂糖凝胶中电泳检测(90 V,35min),用凝胶成像系统拍照记录。其结果为:病料中未检测出支原体特异性阳性条带,表明发病羊无支原体感染。

4 确诊

根据临床诊断、病理解剖诊断、细菌染色镜检、分离培养、生化鉴定及支原体病毒核酸PCR检测,确诊发病黑山羊为链球菌与魏氏梭菌的混合感染。

5 治疗

针对魏氏梭菌和链球菌感染,建议发病羊场首先对发病羊隔离饲养,并对全群免疫羊三联四防疫苗;免疫时,不论羊个体大小一律肌肉注射或皮下注射1mL,注射后14 d产生免疫力,免疫期1年。用青霉素配磺胺类药治疗为主,早期治疗每次使用青霉素的量为80万~160万IU,肌肉注射,每天2次;使用磺胺类药物治疗时按40~60mg/kg,首次加倍,并给每只羊开以下中药处方:黄连5 g,黄芩5 g,栀子5 g,黄柏5 g,银花5 g制粉水煎15min饲喂调理,同时用黄芪多糖肌肉注射,以增强其免疫力,严重患病羊只直接淘汰。针对细颈囊尾蚴的感染,对粪便进行发酵处理,以杀死幼虫;每月驱虫,皮下注射阿维菌素0.2mg/kg或0.6mg/kg混饲。另外,加强环境卫生管理,保持地面整洁,做好圈舍的预防消毒,保障供给清洁饮水。改善饲养环境,避免拥挤而相互攻击;减少围栏粗糙墙面,避免擦伤。特别注意保持母羊舍环境的清洁、干燥,尽可能安排在春、秋天气温暖干燥的季节产仔,可减少病菌的感染。根据以上方法治疗控制后,新发病羊只明显减少,对该羊场发病起到了一定的控制作用,2个月后该羊场未见新病例。

羊魏氏梭菌病无明显季节性,在人工饲养条件下,由于饲料、换季、环境等突然变化及与人接触,导致羊抗病力下降,肠道菌群失调,羊感染魏氏梭菌后导致机体抵抗力下降进而继发感染链球菌,并且这两种病菌有较强的环境适应能力,从而引起魏氏梭菌和链球菌混合感染。用烧碱水对污染的圈舍和四周水沟等环境进行严格消毒,消毒药品至少要有2种以上含有不同成分的药物交替使用,以免产生耐药性;同时合理搭配饲料,增强羊机体抗病能力,还要加强管理,保证食物卫生,营养均衡。

[1] 陈溥言.动物传染病学[M].5版.北京:中国农业出版社,2006:315-320.

[2] 孟霞,孙翠平,唐娜,等.一株山羊魏氏梭菌的分离鉴定及其致病性研究[J].中国畜牧兽医,2015,42(7):1905-1909.

[3] 罗毅.奶牛魏氏梭菌病病原的分离鉴定鉴定[J].中国动物检疫,2011,28(8):61-62.

[4] 陈小平,李施钟.山羊魏氏梭菌混合感染的防治[J].云南畜牧兽医,2008(5):27.

[5] Keith E R,Murdoch D R.Antimicrobial susceptibility profile of Streptococcus pseudopneumoniae isolated from sputum[J].Antimicrobial Agents&Chemotherapy,2008,52(8):2998.

[6] 谢珊珊,刀筱芳,祝存录,等.山羊源链球菌的分离鉴定及其药物敏感性分析[J].黑龙江畜牧兽医,2015(15):171-173.

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