贺滟 贾蝉忆 韩楚依 侯宏保 陈远寿 韩勇

1遵义医学院生理教研室（贵州遵义 563000）；2山西医科大学药剂学教研室（太原 030001）

20⁃羟二十烷四烯酸（20⁃hydroxyeicosatetraeno⁃ic acid，20⁃HETE）是由细胞色素P⁃450（CYP）酶催化花生四烯酸（arachidonic acid，AA）生成的重要血管活性物质［1］。最近研究发现20⁃HETE通过诱导心肌细胞凋亡作用，参与心肌缺血再灌注损伤（ischemia⁃reperfusion injury，IRI）进程中，加重再灌注后心肌梗死面积的发生［2］，但其中机制尚待进一步研究。Ca2+作为重要的第二信使对于维持心肌细胞正常功能起到至关重要的作用，Ca2+平衡紊乱引发的钙超载是诱导细胞凋亡的重要因素［3-4］。在心肌细胞中，钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶（CaMKII）是调节Ca2+稳态平衡的重要激酶，其激活后通过影响肌浆网Ryanodine（RyR2）受体通道、肌浆网钙泵（SERCA2a）功能等作用引起细胞内Ca2+平衡紊乱，从而参与多种因素诱导的心肌细胞凋亡进程中［5-6］。然而，目前尚无20⁃HETE对心肌细胞内钙离子浓度（［Ca2+］i）影响及相关作用机制的研究报道。因此，本研究主要观察20⁃HETE对于培养的乳鼠心肌细胞凋亡及细胞内钙离子浓度的影响，并探究这其中CaMKII信号通路发挥的作用，为临床治疗相关缺血性心肌病提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 20⁃HETE、KN⁃93及Fluo⁃3/AM钙离子荧光探针（Sigma公司，美国），II型胶原酶（Sigma公司，美国），DMEM/F12培养基（HyClone公司，美国），CCK⁃8细胞活性检测试剂盒（同仁公司，日本），TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（南京凯基生物公司，中国），BCA蛋白定量试剂盒（上海碧云天公司，中国），小鼠抗SERCA2a（货号ab205719）、小鼠抗RyR2（货号ab205719）、兔抗CaMKIIδ（货号ab205718）及兔抗磷酸化 CaMKIIδ（p⁃CaMKIIδ，货号ab182647）（Abcam公司，美国），β⁃actin及HRP标记二抗（Proteintech公司，美国），激光共聚焦显微镜（Leica公司，德国），CO2细胞培养箱（Thermo公司，美国）。……