郭向群 曹建民 张志琴 聂奇华

[摘要]建立HPLC法测定小叶女贞果实中的齐墩果酸含量。测定齐墩果酸的色谱条件为：色谱柱 InertSustain C18（250mm×4.6mm， 5μm）；以乙腈-甲醇-0.3%H3PO4水溶液（65：25：10）为流动相进行洗脱，流速为1.000 ml·min-1；检测波长为210 nm；柱温为 40℃。结果表明，齐墩果酸进样量在0.199～1.590μg 范围内（r = 0.9998）线性关系良好，平均回收率为99.15%（RSD% = 1.39，n = 6）。HPLC法操作简便快捷、稳定性好、重现性好，为小叶女贞果实作为药材的开发利用提供依据。

[关键词]HPLC；小叶女贞果实；齐墩果酸；含量测定

[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A

小叶女贞（Ligustrum quihoui Carr.）又名小叶冬青，为木犀科女贞属小灌木，全国各地均有分布。其根叶可入药用于外伤、烫伤等症的治疗，但该植物果实作为药物应用尚未发现相关记载。据文献报道小叶女贞中含β-谷甾醇、齐墩果酸等化合物；其提取物具有免疫调节、清除自由基等作用；女贞子中的齐墩果酸具有抗炎、抗病毒及降低转氨酶作用，已用于肝病治疗。本课题用HPLC法对小叶女贞果实中所含活性成分齐墩果酸进行了测定，为其作为药材的开发利用提供依据。

1 仪器与试剂和药品

1.1 仪器

LC-20A色谱仪（日本岛津公司）；MS105型分析天平（瑞士梅特勒-托得多仪器有限公司）；SB-4200DT超声清洗器（西安超杰仪器设备有限公司）；TG16-WS台式高速离心机（郑州宏朗仪器设备有限公司）。

1.2 试剂和药品

乙腈和甲醇（德国MERCK公司）为色谱纯，水为三重蒸馏水，其他均为分析纯试剂。对照品齐墩果酸（批号为110809-201004，中国食品药品检定研究院）。药材9批，于冬至前采收，经楚雄医专天然药物学教研室陆鸿奎副教授鉴定为小叶女贞果实。

2 含量测定

2.1 色谱条件

色谱柱：InertSustain C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-甲醇-0.3%H3PO4水溶液；检测波长：210 nm；流速：1.000 mL·min-1；柱温：40 ℃；进样量10 μL；齐墩果酸的理论塔板数均大于 8000，分离度大于1.5（见图2）。

2.2 对照品溶液

取齐墩果酸对照品，精密称定，用甲醇制成每1 mL含齐墩果酸0.9940 mg溶液，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液即得。

2.3 供试品溶液

取药材粗粉1 g，精密称定，加入甲醇50 mL，超声30 min后，用甲醇补足减失质量，滤过，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液即得。

2.4 线性考察

精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12、16μL，按“2.1”项下条件分别进行测定，得齐墩果酸面积回归方程： y = 680048x + 83405，r = 0.9999。结果表明，齐墩果酸在该色谱条件的进样量在1.98～11.93 μg之间与峰面积有良好的线性关系。齐墩果酸标准曲线见图1。

2.5 精密度

取浓度为0.9940 mg·mL-1的同一份齐墩果酸对照品溶液10 μL，按“2.1”项下条件测定6次，测得其峰面积的RSD 为1.56%，表明所用仪器精密度良好。

2.6 重复性

称取同一批藥材粗粉6 份，每份1 g，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试液，按“2.1”项下条件测得齐墩果酸质量分数的RSD 为1.02%，表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性

取同一供试品溶液分别于配制后 0、2、4、8、12、20 h 进样10μL，测得齐墩果酸峰面积的RSD 为 0.92%，表明供试品溶液在20 h内稳定。

2.8 加样回收率

取已知含量药材粗粉6 份，每份0.5 g，精密称定，加齐墩果酸对照品适量，按“2.3”项下方法制备供试液后测得齐墩果酸平均回收率为 99.15 %，RSD为1.39 %（见表1）。

2.9 样品测定

精密称取药材粗粉1 g，按“2.3”项下方法制备供试液，测得齐墩果酸质量分数平均值为0.83%，RSD 为 1.73%。色谱图见图2，测定结果见表2。

3 讨论

HPLC条件考察了Inertsil ODS-SP和InertSustain C18等不同色谱柱，其中InertSustain C18（5μm， 250mm×4.6mm）柱分离效果好、柱效高，故选该柱进行含测。考察了甲醇-磷酸、乙腈-磷酸、乙腈-甲醇-磷酸，结果乙腈-甲醇-0.3%磷酸（65：25：10）分离效果较好，最终确定以该溶剂系统为洗脱剂。以二极管阵列检测器于 210 nm 波长处进行全波长扫描，基线噪声较低，色谱图信息较完全，特征峰响应面高，故选210 nm为测定波长。建立的方法能简捷、准确地测定药材中齐墩果酸的含量，该法测定比较稳定，且回收率和重现性均较好。

从色谱图可以看出药材中除含齐墩果酸外，尚有很多未知色谱峰，有待进一步研究。

[参考文献]

[1] 宋志远.小叶女贞果实的化学成分及其活性研究[D].哈尔滨：哈尔滨工业大学， 2013.

[2] 李晓蒙，蔡志蓬，李显奇.小叶女贞化学成分研究[J].广东药学院学报， 1998，14（2）：93-94.

[3] 洪新，杨肇享，周向东.小叶女贞提取物-M2自由基清除剂作用的实验研究[J]. 第三军医大学学报，1995，17（4）：341-342.

[4] 韩兆东，阮月芹，宋月雁，等.小叶女贞对免疫功能损伤小鼠T淋巴细胞免疫功能的调节作用[J].滨州医学院学报， 2008，31（4）：258-261.

[5] 张明发，沈雅琴.齐墩果酸和熊果酸保肝药理作用的研究进展[J].抗感染药学， 2012，9（1）：13-19.

[6] 戚志华，王四旺，王剑波，等.不同生长期女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含量变化[J].中国中药杂志， 2007，32（15）：1583-1585.

[7] 彭婷婷，王卫华.高效液相色谱法测定女贞子中齐墩果酸的含量[J].医学理论与实践，2011，24（20）：2503-2505.

[8] 胡芳，赵智慧，刘孟军.HPLC法测定不同枣品种果实中白桦酯酸、齐墩果酸和熊果酸含量[J].中国农学通报，2011，27（5）：434-438.

[9] 蒋珍菊，王周玉.不同方法提取女贞子中齐墩果酸的含量[J].安徽农业科学， 2011，39（26）：15979-15981.