马姣　胡娅琳　赵益侠　许凤

摘要：利用薄层色谱（TLC）与显微傅里叶变换红外光谱（Micro FHR）联用技术检测减肥保健品中非法添加酚酞、西布曲明、芬氟拉明3种组分。供试品用甲醇超声提取，以硅胶GFzu铝合金薄层板为固定相，以氯仿一甲醇一氨水（11：1：0.12）为展开剂，在紫外灯254nm下检视，薄层色谱法（TLC）快速初筛，显微傅里叶变换红外光谱（Micro FTIR）进行定性检测。结果显示在随机抽取的9批供试品中，5批检测到酚酞，7批含有西布曲明，2批含有芬氟拉明。所建立的方法专属性强、灵敏度高，可以作为该类保健品非法添加酚酞、西布曲明、芬氟拉明的检测方法。

关键词：薄层色谱法；显微傅里叶变换红外光谱法；酚酞；西布曲明；芬氟拉明

文献标志码：A 文章编号：1674-5124（2018）05-0053-05

0引言

减肥保健品是随着审美观念的变化衍生出来的一种瘦身产品，因其快速的减肥效果受到很多人尤其是女性的喜爱。但是有很多对人体有害的减肥产品充斥着市场，让减肥保健品市场鱼龙混杂。减肥产品非法添加物中酚酞、西布曲明、芬氟拉明（结构如图1所示）因其减肥效果好，是一些常见的添加物。酚酞属刺激剂，用于慢性便秘，长期使用可损害肠神经系统，且很可能是不可逆的；西布曲明为非苯丙胺类食欲抑制剂，通过抑制人的食欲，达到减肥的效果，但会增加严重的心脑血管不良事件；芬氟拉明为苯丙胺类食欲抑制药，会导致心脏瓣膜病变等不良反应。故减肥保健品非法添加化学药物的行为不仅违反了食品卫生法规，而且严重危害人体健康。

目前，减肥保健品中非法添加西药的常用检测方法有薄层色谱法（TLC）液相色谱法（HPLC）、液相色谱一质谱法（HPLC-MS），表面增强拉曼光谱法（SERS）等。本实验中，薄层色谱方法作为初筛手段，简单快速，再联用显微傅里叶变换红外光谱的高灵敏度、高专一性对非法添加药物快速检测。

1实验部分

1.1仪器与试剂

显微傅里叶变换红外光谱仪NICOLET iN10（Thermo SCIENTIFIC）；硅胶GF₂₅₄铝合金薄层板（德国默克公司）；超声波清洗仪UIP50（南京垒君达超声电子设备有限公司）：高速台式离心机TGL-16（上海医用分析仪器厂）。

酚酞对照品（A，批号：100102）、西布曲明对照品（B，批号：100624）、盐酸芬氟拉明对照品（c，批号：0073-9501）：均购自中国药品生物制品检定所。实验中所用的9批减肥保健品均购于市场：其他试剂均为分析纯。

对照品溶液和混合对照品溶液的制备：分别精密称定A、B、C 3种对照品适量，加入甲醇溶解、超声5 min，制成浓度为1 mg/mL的A溶液、2mg/mL的B溶液和5 mg/mL的C溶液作为对照品溶液和同等浓度的混合对照品溶液。

供试品溶液的制备：取胶囊剂10粒或袋泡茶4包，称取内容物约1/10置于10mL容量瓶中，加入5mL甲醇振摇、超声10min后，离心5min（4000dmin），取上清液作为供试品溶液。

1.2实验条件

以硅胶GF搿铝合金薄层板为固定相，以氯仿一甲醇一氨水（11：1：0.12）为展开剂，点样量为4μL，饱和5 min后，展开、取出晾干，在紫外灯254 nm下检视定位。再将TLC板上对照品斑点刮下，放在2 mL的离心管中用0.5mL的甲醇溶解，超声5min、高速离心3～5 min，取上清溶液放在离心管中室温挥干，然后放在金板上进行显微红外光谱检测。采集模式：反射，检测条件：液氮冷却后检测，采集时间：12 s，扫描：64次，光谱分辨率：8 cm^-1。数据处理软件为OMNIC工作站和origin6.1。

2结果与分析

2.1对照品TLC及Micro FTIR测定

用微量进样器在硅胶GF搿铝合金薄层板上点对照品溶液及对照品混合溶液各4μL，按1.2节下实验条件进行测定。再取极少量的酚酞、西布曲明、芬氟拉明对照品粉末放在金板上，进行显微红外光谱检测。结果如图2（a）～图2（d）所示。

由图2（a）可知，酚酞、西布曲明和芬氟拉明3种成分在本实验色谱条件下分离较好。分析图2（b）～图2（d）可知，对照品粉末与刮板甲醇提取后的对照品红外谱图峰形、峰位基本一致。图2（b）中3 289.50cm^-1处的吸收峰，说明分子中-OH的存在：1 718.24，1 216.52，1 123.64 cm^-1的吸收峰，說明分子中苯甲酸酯的存在；1 595.68，1 509.50，1 460.46，1 170.73，1 106.82 Cm^-1的吸收，说明分子中有与取代基共轭的苯环存在：图2（c）中3 333.0 cm^-1吸收峰，说明分子中含有结晶水；2921.5 cm^-1吸收峰，说明环丁基的存在；1 566.0，1 414.5，1 078.9，1 017.6，793.3.0cm^-1吸收峰，说明氯苯基的存在；2 361.3，1 649.5，1 335.0cm^-1吸收峰，说明是叔胺盐。图2（d）中2951.5，2721.6，2479.4，2389.3，1452.8，1 334.5cm^-1吸收峰，说明分子为仲胺盐；15879，、894.9，795.5cm^-1吸收峰，说明间位取代苯的存在；1 203.0，1118.4，1073.5cm^-1吸收峰，说明三氟代物的存在。

2.2 TLC及Micro FTIR最低检测限考察

用微量进样器在硅胶GF₂₅₄铝合金薄层板上点1.1节下的对照品溶液，酚酞和西布曲明的点样量分别为1，2，3，4μL，芬氟拉明的点样量分别为0.5，1.0，1.5，2μL，按1.2节下的TLC条件检测，结果酚酞在1μg时可以检出，西布曲明在2μg时可以检出，芬氟拉明在2.5μg时可以检出。将TLC板上对照品斑点刮下，取甲醇提取挥干后的粉末放在金板上进行显微红外光谱检测。结果酚酞和西布曲明在2μg时可以检出，芬氟拉明在2.5μg时可以检出。由此说明本实验条件下，TLC法及Micro FTIR方法灵敏度均较高。

2.3真实样品检测

2.3.1TLC检测

用微量进样器取1.1节下的对照品混合溶液及1-9号供试品溶液各4μL点于硅胶GF₂₅₄铝合金薄层板上，按1.2节下的检测条件检测，结果如图3所示。

由图可知，由比移值和斑点颜色初步判定供试品1，2，3，6，7，8批次含有酚酞、供试品1-9批次含有西布曲明、供试品2，3，5，8，9批次含有芬氟拉明。

2.3.2 Micro VrIR检测

薄层色谱方法虽然简单快速，但定性能力有限，易出现假阳性结果，因此只能作为初筛手段。与常规红外光谱相比，显微傅里叶变换红外光谱灵敏度高，可以实现痕量样品的分析：采用溴化钾压片法会出现水的吸收峰，还会使谱图变形，而Micro FTIR技术分析时不需要添加任何稀释剂，能反映样品的本质光谱。将图3中对照品的斑点及相同比移值处供试品中疑似含有非法添加组分的斑点刮下，提取处理后取其少量粉末进行显微红外测定。结果如图4～图6所示。

由图4分析6个批次供试品的显微红外谱图，在供试品1，2，3，7，8的谱图中，几个特征峰包括（V_OH、V_C=O、Vc_C-O-C、V_C=C）的峰位、峰形基本上与酚酞刮板对照品的显微红外谱图一致，而供试品6无酚酞特征峰，说明其不含酚酞组分。

由图5分析9批供试品的显微红外谱图，在供试品1，2，3，4，7，8，9显微红外谱图中，特征峰及相关峰（V_CH3、V_C-N、V_C=C、β_=C-H、γ_=C-H）的峰位峰形基本上与西布曲明刮对照品的显微红外谱图一致，而供试品5、6无西布曲明特征峰，说明其不含西布曲明组分。

由图6分析2，3，5，8，9等5个批次供试品的显微红外谱图，供试品5，9几个特征峰（仲NH₂⁺伸缩、V_CH3、V_C=C、C_C-N）的峰位、峰形與芬氟拉明刮板对照品的显微红外图谱基本一致，认为在供试品5，9中非法添加芬氟拉明，2，3，8号供试品均无相关特征峰，说明不含盐酸芬氟拉明。

3结束语

在进行显微傅里叶变换红外光谱检测时，要保证前处理方法的一致性，即需要在相同的条件下将TLC薄层板上的对照品和样品斑点刮下、提取和测定，否则无可比性。另外，扫描不同样品区域时出现的吸收峰个别部位略有差别，需要多次测定取平均值。

本实验采用薄层色谱一显微傅里叶变换红外光谱联用技术对减肥保健品中非法添加的酚酞、西布曲明、芬氟拉明进行快速检测，在被检测的9批供试品中，5批供试品检测出非法添加酚酞，7批供试品非法添加西布曲明，2批供试品非法添加芬氟拉明。此方法专属性强、灵敏度高、准确性好，适用于对该类化合物的快速检测。

（编辑：徐柳）