吴逸璘

吉尔生化（上海）有限公司 上海 200241

植物病害经常导致农业生产的重大损失。化学杀菌剂在控制作物病害中起重要作用。然而，病原真菌的多样性和可变性使得难以化学控制该疾病；此外，化学灭菌引起了环境污染和生态平衡的广泛关注。因此，植物病害的生物防治受到越来越多的关注。同时，研究新型抗菌物质在预防和治疗人类和动物疾病中的应用具有重要意义。

1 材料和方法

1.1 菌株

试验所用菌种蜡状芽孢杆菌，病原真菌棉花枯萎病菌、南瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、芥菜炭疽病菌、玉米小斑病菌、柑橘炭疽病菌及黑曲霉菌由西南农业大学生物技术研究中心提供。

1.2 主要试剂

DEAE52纤维素，Whatman产品；SephadexG100Pharmacia产品；硅胶GF254，青岛海洋化工厂产品；胰蛋白酶，Difco进口包装；蛋白酶K，BM产品；碱性蛋白酶，无锡酶制剂厂生产。

1.3 培养基

KMB培养基：每升20克三角蛋白，10克甘油，41.5克K2HPO，1.5克 MgSO4·7H2O，pH7.0；GPS培养基：每升 0.35g柠檬酸钠，KH2PO40.7g，MgSO4·7H2O0.2g，CaCl2·2H2O0.1g，葡萄糖10g，蛋白胨2.5g。

1.4 抑菌物的提取与纯化

粗菌提取物：过滤培养液后，调节pH至3.5，以5000r/min离心，用少量蒸馏水溶解沉淀，调节pH至7.0，真空干燥，加入80%甲醇至完全提取物，以4000r/min提取提取物进行离心。加入上清液，快速搅拌2.5体积的乙醚并以4000r/min离心，浓缩所得上清液并干燥，得到粗提物。

SephadexG100色谱和DEAE52纤维素色谱：在LKB自动柱色谱系统上进行。用0.05mol/LNaHCO3缓冲液（pH8.0）平衡SephadexG100，填充在柱（16mm×800mm）中，加载100mg，用平衡缓冲液洗脱，流速为18mL/h，并在275℃检测。纳米。收集级分，每管3mL，滤纸用于测量每个管的抗菌活性。将预处理的DEAE52纤维素用0.02mol/LTris-HCl缓冲液（pH7.6）平衡，填充在柱（16mm×100mm）中，加载50mg，用50mL缓冲液冲洗，然后与0一起使用。……