项协隆 ，邵思思 ，陈宇 ，陈春 ，董飞侠

1.浙江中医药大学附属温州中医院肾内科，浙江 温州 325000；2.温州老年病医院，浙江 温州 325000

膜性肾病(Membranous nephropathy，MN)是成人肾病综合征的主要病理类型之一，在我国约占原发性肾病综合征的20%，近年来发病率逐渐升高[1]。足细胞损伤是MN发病的关键，而内质网应激(endoplasmic recticulum stress，ERS)是足细胞发生凋亡的最重要机制之一。黄芪具有益气健脾、补中、利尿等功效，是治疗MN的常用中药，其重要成分黄芪甲苷(astragalosideⅣ)具有调节机体免疫力、保护组织器官、降低血糖、抗细胞凋亡和抗炎抗病毒等多方面作用[2]，体外实验亦证实黄芪甲苷对补体膜攻击复合物诱导的足细胞损伤有保护作用[3]，但对MN的具体作用机制尚不清楚。本研究通过观察黄芪甲苷对被动型海曼(Heymann)肾炎大鼠葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(phosphorylated protein kinase R-like ER kinase，p-PERK)、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α(phosphorylated eukaryotic initiation factor 2 alpha，peIF2α)等内质网应激相关因子表达的影响，进一步明确黄芪甲苷对被动型Heymann肾炎的保护作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雄性SPF级SD大鼠40只，体质量170～200 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(沪)2012-0002，合格证编号：2015000535634，于温州医科大学实验动物中心SPF级实验室饲养，保持(50±5)%相对湿度，25℃恒温，人工光照，明暗各12 h，自由饮食饮水。

1.2 药物与试剂 盐酸贝那普利片(北京诺华制药有限公司，批号：X2445)，黄芪甲苷(纯度98%，成都锦泰和医药化学技术有限公司，批号：160802)。羊抗大鼠Fx1A抗体血清(Probetex inc.，批号：169-06G)， p-PERK 抗 体(Santa， 货 号 ： sc32577)，p-eIF2α抗体(Santa，货号：sc101670)，GRP78抗体(Santa，货号：sc376768)，GAPDH抗体(联科生，货号：MAB5465)，兔二步法检测试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司，货号：PV-6001)，DAB显色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)，BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天公司)，ECL Plus发光试剂盒(碧云天公司)。……