邓 菲 ， 孙 进 ， 王红霄

(1.沈阳药科大学药学院 ， 辽宁 沈阳 117004 ； 2.华北制药集团动物保健品有限责任公司 ， 河北 石家庄 050041)

加米霉素(Gamithromycin)是一种新型的半合成大环内酯类动物专用抗生素，由法国梅里亚公司研发，通过抑制细菌RNA依赖性蛋白合成而起抑菌和杀菌作用，对溶血曼氏菌、多杀性巴氏杆菌、睡眠嗜血杆菌等引起牛呼吸系统疾病(BRD)的病原菌有很强的抗菌活性，对支原体、马链球菌、马红球菌、胸膜肺炎放线菌等的抗菌活性也较强。2007年9月欧盟批准加米霉素注射液(Zactran)上市，主要用于治疗非泌乳牛呼吸系统疾病(BRD)[1～3]。加米霉素具有单次给药、吸收迅速、生物利用度高、低残留、安全高效等优点，在养殖动物呼吸系统感染性疾病防治中具有广阔的应用前景。按照农业部1247号公告要求，华北制药集团动物保健品有限责任公司于2016年4月至2016年10月对该公司生产的加米霉素注射液开展了治疗牛呼吸系统疾病(BRD)的Ⅲ期临床试验[4]。

1 试验时间和地点

本试验实施时间为2016年4月至2016年10月，试验病例来自于四川省广安市某牛场。

2 材料与方法

2.1 试验药物 加米霉素注射液，华北制药集团动物保健品有限责任公司提供，自主研发。对照药：加米霉素注射液(ZACTRAN®)，梅里亚有限公司生产。

2.2 病例选择与分组

2.2.1 病例入选标准 对自然发病牛先进行全面的临床检查，测量体温(直肠温度)，按标准对其精神状态和呼吸症状进行评分。

病牛入选试验标准：(1)自然发病牛；(2)至少15日龄，品种、性别、体重不限；(3)表现出典型的牛呼吸道疾病(BRD)症状，同时满足：精神沉郁评分≥1；呼吸症状评分≥1，直肠温度≥40.0 ℃；(4)采集病牛鼻拭子，可检出引起BRD的病原菌(多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、睡眠嗜组织菌等)。

2.2.2 病例剔除标准 (1)患有非BRD相关疾病、受伤、过度虚弱；(2)试验开始前6个月内接种过BRD菌苗，或在试验前30日内接受过抗菌药治疗；产奶供人食用或试验后90日内将产奶供人食用的牛，或预计在2个月内分娩可能生产人用乳品的怀孕母牛。

2.2.3 病例分组与给药 筛选出60例符合要求的BRD病牛。根据牛耳号，将病牛随机分配到2个组，每组30头病牛，要求两组病牛的发病严重程度基本一致。试验分组与给药信息见表1。

表1 试验分组与给药

注：在试验0 d对病牛进行称重，计算剂量并给药

2.3 试验周期 所有病牛的试验周期均为14 d。即从给药0 d至给药后14 d，每日对病牛进行检查。

2.4 试验病例淘汰 给药后至第1天观察前，病牛出现死亡，需退出本试验，但不判为治疗无效；判定为治疗无效的病牛，需从本试验中淘汰，并及时给予其他药物治疗；试验病牛出现与BRD无关的不良状况(如受伤等)时，由试验负责人或主治兽医决定是否从本研究中淘汰。

2.5 观察指标

2.5.1 临床检查 精神状态与呼吸症状：从给药0 d至给药14 d，每天观察病牛，按标准对其精神状态、呼吸症状进行评分。体温：从给药0 d至给药后14 d，每天在相同时间测量病牛的体温(直肠温度)。体重：在试验0 d，测量病牛体重，并根据病牛体重计算其给药剂量。注射部位反应：从给药0 d至给药后14 d，每天观察病牛注射部位反应。

2.5.2 微生物学检查 在给药前(给药0 d)，采集9头病牛鼻拭子，送实验室进行BRD相关病原菌(多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、睡眠嗜血杆菌等)分离鉴定。在试验过程中，若有病牛死亡，需对尸体进行剖检，同时采集肺组织进行BRD相关病原菌分离鉴定。在试验过程中，若病牛因BRD治疗无效需淘汰，在淘汰当天需采集该病牛鼻拭子进行BRD相关病原菌分离鉴定[5]。

2.5.3 病理剖检 试验过程中所有死亡的病牛均要进行病理剖检，对病变组织进行拍照；同时采集肺组织进行BRD相关病原菌分离鉴定。

2.6 疗效判定标准

2.6.1 无效 (1)从给药2 d至给药后14 d，病牛连续2日：精神沉郁评分≥1，且呼吸症状评分≥1，且直肠温度≥40 ℃，判定为治疗无效；(2)从给药2 d至给药后14 d，病牛由于BRD病情严重，需从试验中退出并给予其他药物治疗；或由于BRD死亡，判定为治疗无效。

2.6.2 有效 从给药2 d至给药后14 d，病牛未被判定为治疗无效，但精神、呼吸、直肠温度三项指标未完全恢复正常，判定为治疗有效。

2.6.3 治愈 从给药2 d至给药后14 d，病牛精神、呼吸、直肠温度均恢复正常，且连续7 d未出现病情反复，判定为治愈。

2.7 不良反应 从给药0 d至给药后14 d，每日对病牛进行观察，对病牛出现的不良反应进行评估，并记录。

3 结果与分析

3.1 试验病牛入选与分组 按试验病牛入选标准，从上述70余头BRD病牛中遴选60头开展试验。根据病牛耳号，将它们随机分配到受试药物组(Ⅰ组)和对照药物组(Ⅱ组)，每组30头。病牛的年龄和体重统计结果见表2。平均年龄为8月龄，平均体重为198 kg，两组病牛的年龄与体重比较差异均不显著(P>0.05)。

3.2 试验病牛临床表现 观察所有病牛在给药0 d(给药前)至给药14 d的临床表现，测量其体温(直肠温度)，按标准对其精神状态、呼吸症状进行评分。

表2 试验病牛年龄与体重统计结果

注：组间数据比较，具相同大写字母表示差异不显著(P>0.05)、具不同大写字母表示差异显著(P≤0.05)

3.2.1 试验病牛体温测量结果 从给药0 d至给药14 d，每日在相同时间点测量病牛体温(直肠温度)。统计结果见中插彩版图1。结果可见，给药前(给药0 d)所有病牛均存在发热症状，体温(直肠温度)均在40℃以上。

统计分析病牛的体温情况，组内比较发现：无论受试药物组(Ⅰ组)还是对照药物组(Ⅱ组)，给药1 d至给药14 d的体温均显著降低于给药0 d(给药前)的体温(P≤0.05)；组间比较发现：给药前(给药0 d)两组病牛的体温无显著差异(P>0.05)，给药1 d至给药后14 d，两组病牛的体温同样无显著差异(P>0.05)。

3.2.2 试验病牛精神状态评分结果 从给药0 d至给药后14 d，每日观察病牛的精神状态。统计结果见中插彩版图2。

结果显示，两组病牛在给药0 d(给药前)均有明显的精神沉郁表现。受试药物组(Ⅰ组)精神状态1分的病牛比例为53.3%(16/30)，精神状态2分的病牛比例为46.7%(14/30)；对照药物组(Ⅱ组)精神状态1分的病牛比例为56.7%(17/30)，精神状态2分的病牛比例为43.3%(13/30)。

统计分析病牛的精神状态评分，组内比较发现：无论受试药物组(Ⅰ组)还是对照药物组(Ⅱ组)，给药1 d至给药后14 d的精神状态评分均显著降低于给药0 d(给药前)的精神状态评分(P≤0.05)；组间比较发现：给药前(给药0 d)两组病牛的精神状态评分无明显差异(P>0.05)，给药1 d至给药后14 d，两组病牛的精神状态评分也无明显差异(P>0.05)。

3.2.3 试验病牛呼吸症状评分结果 从给药0 d至给药后14 d，每日观察病牛的呼吸症状。统计结果见中插彩版图3。

上述结果显示，给BRD病牛单次皮下注射推荐剂量的受试药物(华北制药生产的加米霉素注射液)和对照药物(梅里亚公司生产的加米霉素注射液)，均可快速有效地改善病牛的发热症状，使其体温恢复正常；同样也可快速有效地改善病牛呼吸急促、咳嗽、流鼻液等呼吸困难症状；病牛的精神状态也能得到快速恢复。两药比较，它们对BRD病牛临床症状的改善效果基本相当。

3.3 注射部位反应 从给药0 d至给药后14 d，每天观察病牛皮下注射部位(肩前部)的反应情况。结果可见，所有病牛的皮下注射部位均未出现坚实、水肿、疼痛等刺激反应。

3.4 试验病牛鼻拭子微生物学检查结果

3.4.1 试验病牛给药前鼻拭子病原菌检测结果 数据可见，5头病牛检出了多杀巴氏杆菌(5/9，55.6%)；3头病牛检出了溶血曼氏杆菌(3/9，33.3%)；2头病牛检出了牛支原体(2/9，22.2%)；3头病牛检出了肺炎链球菌(3/9，33.3%)。另外，还从一些病牛鼻拭子分离出了金黄色葡萄球菌(2/9，22.2%)、大肠杆菌(4/9，44.4%)、肺炎克雷伯菌(2/9，22.2%)、芽孢杆菌(1/9，11.1%)等，没有检出睡眠嗜血杆菌(0/9，0%)。

表3 给药前(给药0天)部分试验病牛鼻拭子病原菌检出结果统计

注：给药前采集了9头试验病牛鼻拭子做病原菌检测

3.4.2 治疗无效试验病牛鼻拭子病原菌检测结果 试验中(给药1 d至给药后14 d)，Ⅰ组、Ⅱ组各有3头病牛被淘汰，均判定为治疗无效。

表4 给药后治疗无效病牛鼻拭子病原菌分离鉴定结果统计

注：Ⅰ组和Ⅱ组各有3头病牛被淘汰，判定为治疗无效

数据显示，Ⅰ 组和Ⅱ 组治疗无效病牛鼻拭子中均未检出多杀巴氏杆菌、溶血曼氏杆菌、牛支原体、肺炎克雷伯菌，也未检出睡眠嗜血杆菌。但却分离出了肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、芽孢杆菌等。

上述结果显示，给BRD病牛单次皮下注射推荐剂量的受试药物(华北制药生产的加米霉素注射液)和对照药物(梅里亚公司生产的加米霉素注射液)，对牛呼吸道感染的多杀巴氏杆菌、溶血曼氏杆菌、牛支原体等病原菌有很好的清除作用；而对大肠杆菌等不敏感菌的清除作用有限。

3.5 试验病牛死亡及剖检情况 从用药0 d至用药后14 d，未出现试验病牛死亡情况，存活率为100%。因此未对试验病牛实施剖检。

3.6 受试药和对照药疗效比较 给药0 d至给药后14 d期间，综合考察各病牛的体温、精神状态、呼吸症状等临床表现，按标准分别判定各试验病牛给予受试药物和对照药物后的疗效。统计两组病牛的治愈率、有效率和无效率，结果见表5。

表5 两组试验病牛的治疗结果统计 (n=30)

数据显示，给BRD病牛单次皮下注射推荐剂量的受试药物(华北制药生产的加米霉素注射液)和对照药物(梅里亚公司生产的加米霉素注射液)，均具有良好的治疗效果。受试药和对照药对BRD的疗效相当，治愈率和有效率均达到90%。

3.7 不良反应 从给药第0天至给药后第14天，每天观察试验病牛的不良反应发生情况。结果所有试验病牛均未出现BRD症状之外的异常表现和体征(如呼吸急剧加快，心跳明显升高，可视黏膜水肿等过敏反应体征；呕吐、腹泻等病症)；更未出现死亡情况。

4 结论

4.1 华北制药集团动物保健品有限责任公司生产的加米霉素注射液对牛呼吸道疾病(BRD)有良好治疗效果。按推荐剂量(6 mg/kg体重)给BRD病牛单次皮下注射，给药1 d后即可显著改善病牛发热、精神沉郁，呼吸困难等症状(P≤0.05)，给药4～5 d后病牛即可恢复正常，治疗有效率可达90%，与梅里亚公司生产的加米霉素注射液疗效相当(P>0.05)。

4.2 加米霉素可有效清除牛呼吸道内BRD相关主要病原菌。按推荐剂量(6 mg/kg体重)给BRD病牛单次皮下注射华北制药集团动物保健品有限责任公司生产的加米霉素注射液，牛呼吸道感染的多杀巴氏杆菌、溶血曼氏杆菌、牛支原体等病原菌都能得到有效清除，与梅里亚公司生产的加米霉素注射液作用效果相当。但加米霉素对牛呼吸道感染的大肠杆菌等不敏感菌的清除作用有限。

4.3 加米霉素注射液用于牛的BRD治疗较安全。按推荐剂量(6 mg/kg体重)给BRD病牛单次皮下注射华北制药集团动物保健品有限责任公司生产的加米霉素注射液，注射部位未出现坚实、水肿、疼痛等刺激反应，也未观察到BRD症状之外的异常表现和体征，更未出现用药病牛死亡情况。

4.4 华北制药集团动物保健品有限责任公司生产的加米霉素注射液用于治疗牛呼吸道疾病(BRD)安全有效，临床中可推广应用。

参考文献：

[1] Clinical and Laboratory Standards Institute. Approved standard.9th edition. CLSIM07-A9. Clinical and Laboratory Standards Institute guidelines[J].Wayne.PA (2012)[S].

[2] http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Scientific_Discussion/veterinary/000129/WC500068716[J].pdf.EMA. 2008. The European Agency for the Evaluation ofMedicinal Products.Zactran:EPAR-Scientific Discussion[EB /OL].

[3] http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Maximum_Residue_Limits_-_Report/2015/02/WC500183124[J].pdf. EMA.2014. European public MRL assessment report (EPMAR): Gamithromycin (porcine)[EB /OL].

[4] 农业部.公告第1247号. 抗菌药物Ⅱ、Ⅲ期临床药效评价试验指导原则：2016:33-39.

[5] 中国科学院微生物研究所.《伯杰细菌鉴定手册》翻译组.伯杰细菌鉴定手册[M].北京:科学出版社,1984.