弓形虫多态性ROP16效应分子诱导宿主A549细胞基因表达谱的差异研究
2018-04-13,,2,,,,2
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弓形虫是一种可引起人兽共患病的专性细胞内寄生原虫,该病呈世界性分布,全球约有1/3的人感染弓形虫[1]。孕妇感染后可发生垂直传播,导致胎儿发育异常、畸形、死胎等。据统计,85%感染成活的婴儿会出现中枢系统异常,极大地影响优生优育。另外,弓形虫也是导致免疫功能损伤或缺陷病人死亡的重要原因之一[2-3]。
弓形虫主要有3种典型基因型,即Ι型、Ⅱ型和Ⅲ型。尽管3种基因型虫株的遗传同源性高达98%,但毒力却相差悬殊。其中,Ι型弓形虫(RH株)毒性最强,Ⅱ型(Me49株)和Ⅲ型(VEG株)毒性较弱[4]。弓形虫的毒力主要表现为对宿主细胞的侵袭力、在胞内的增殖速率,能否在胞内形成包囊及对宿主的致病性和致死性等。弓形虫棒状体蛋白16(ROP16)是一种蛋白激酶,在弓形虫入侵宿主细胞的过程中发挥了极其重要的作用[5]。研究发现,ROP16是重要的毒力调节因子,它主要定位于宿主细胞核内[6-7],不同弓形虫株间的ROP16基因序列呈多态性,可调节不同虫株感染的宿主细胞中的基因转录水平的差异。因此,研究不同基因型ROPl6对宿主基因表达谱的影响,对弓形虫的防治具有重要意义。本研究以A549细胞株为研究模型,建立了弓形虫Ι、Ⅱ和Ⅲ型ROP16稳定转染的细胞株,通过表达谱芯片技术筛选差异表达基因,并对差异基因进行GO分析和信号通路富集分析(pathway analysis)。
1 材料与方法
1.1材料与试剂弓形虫RH、Me49株由本实验室保存;ICR小鼠购自宁夏医科大学动物中心;Trizol(Invitrogen公司,美国);质粒小提试剂盒;2×Taq PCR Master Mix(天根生化科技有限公司,北京);Real time PCR 试剂盒(宝生物,大连);……
