廖　凯, 刘　勇, 万子衿, 李　巍

(1. 扬州大学医学院, 江苏 扬州, 225001; 2. 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室, 江苏 扬州, 225001; 3. 大连理工大学 生命与医药学院, 辽宁 盘锦, 124221)

CYP2C9是人体内重要的药物I相代谢酶，参与了超过15%临床药物的代谢清除[1], 其底物包括S-华法林、苯妥英、双氯芬酸、格列甲嗪和甲苯磺丁脲等。CYP2C9基因具有高度的多态性，目前已发现超过60种CYP2C9突变体。这些基因多态性可能影响其底物药的代谢速率及血药浓度，在药物不良反应中起到了关键作用[2-3]。故研究CYP2C9基因多态性对临床安全用药、药物不良反应的预测及指导合理用药具有重要的意义。

CYP2C9*8 (449G>A)为非裔美国人CYP2C9常见的单碱基突变[4-5], 而在亚洲人中该位点常见突变为CYP2C9*27 (499G>T), 在蛋白序列上CYP2C9蛋白上150位精氨酸分别突变为赖氨酸和组氨酸[2, 6]。体外数据[7-8]表明，在对催化底物代谢速率的影响上, CYP2C9*8与CYP2C9*27表现出了不同的选择性。这两种突变均导致CYP2C9的底物氯沙坦等药物的代谢清除速率降低。CYP2C9*8代谢双氯芬酸和氟西汀的速率与野生型CYP2C9相比均下降，而CYP2C9*27催化双氯芬酸和氟西汀代谢的速率与野生型并无显著差异[9-10]。此外CYP2C9*8代谢清除苯妥英速率降低，而CYP2C9*27却导致了代谢清除速率的显著上升[11]。目前CYP2C9*8与CYP2C9*27突变体对酶活性影响的机制仍未完全明确，因此构建CYP2C9*8与CYP2C9*27的表达体系，对研究底物代谢的变化和催化机制十分必要。

细胞色素P450(CYPs)为膜蛋白，大肠杆菌表达CYPs后与脂质重构是目前常见的表达CYPs的方法之一[12], 另外常用的真核表达模型为昆虫细胞模型，具有表达量高的优点，但没有足够的辅酶表达以支持反应[13]。这些……