郝爽　罗璋　张振国　刘肖莲　刘国山　冯守明

摘要：为研究非连续密度梯度离心法分离半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Gunther）外周血白细胞的影响因素，探索Percoll分离半滑舌鳎外周血白细胞的最佳方法，试验设置了密度梯度为1.015/1.065 g/mL、1.020/1.070 g/mL、1.025/1.075 g/mL、1.030/1.080 g/mL、1.035/1.085 g/mL的五种分离液，分别于600×g、800×g和1 000×g离心力下进行半滑舌鳎白细胞分离，以所得白细胞密度、白细胞纯度、活细胞率作为评判指标，并对分离的白细胞进行了显微观察、鉴定，比较不同密度梯度分离液、不同离心力的分离效果。结果显示：以1.020/1.070 g/mL密度梯度分离液、800x g离心力条件下分离效果最佳，每毫升外周血可分离到白细胞数量平均为（2.485±0.182）×10个，白细胞纯度平均为（97.926±0.679）%，活细胞率平均为（97.037±0.925）%。

关键词：非连续密度梯度离心；外周血白细胞；半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Giinther）

随着水产动物疾病防治技术的发展，离体细胞作为具有生物活性的体外试验材料，越来越多应用在水产动物免疫学、病毒学、生理学和药物学等多个领域。相比于传统方法，基于细胞水平开展试验研究具有样品需要量少、筛选效率高、周期短、规模大等特点，因此开展水产动物细胞分离培养在理论研究和实际应用方面都具有重要意义。外周血白细胞具有类似T、B淋巴细胞的分类，是鱼类体液免疫和细胞免疫的重要组成部分，要研究机体的免疫机制，获得数量充足、质量好的白细胞是前提条件。

鱼类属于低等脊椎动物，不同鱼类的血液指数和血细胞组成不同，细胞分离条件也存在许多差异，导致鱼类外周血白细胞分离方法没有统一标准，必须针对研究对象调整分离条件，才能达到细胞的最佳分离效果。……